为什么page总是1_【干货】SDS-PAGE（聚丙烯酰胺）蛋白电泳原理详解

Western blot是一项在复杂样本中检测蛋白质表达水平的技术，至今已有超过40年的历史，并成为了蛋白质研究中最常用的工具之一。

WB流程一般是这样的：首先通过SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳使蛋白质样本分离，再将凝胶上的蛋白电泳转移到固相载体上（NC膜或者PVDF膜），方便后续印迹显影操作，然后使用封闭液将封闭非特异位点，以避免抗体的非特异性吸附，这样固定的蛋白质即可与特异性的多克隆或单克隆抗体相互作用。最后通过化学发光法或荧光方法进行蛋白条带显影。

其中SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳条件是关系到蛋白条带是否均一、整齐、干净的关键步骤，下面小编整理了SDS-PAGE电泳的原理与操作关键，为你理清每一个关键试剂和操作的背后的故事。

• SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和步骤

SDS-PAGE （十二烷基硫酸钠–聚丙烯酰胺，sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gel electrophoresis）凝胶电泳是一种可以根据蛋白质的分子量分离样本中蛋白的技术。在电荷的影响下分离大分子称为电泳（electrophoresis）。在SDS-PAGE中使用的凝胶是聚丙烯酰胺（polyacrylamide），使蛋白质呈线性化的试剂是SDS。 因此得名SDS-PAGE。

（一）SDS-PAGE的原理:

首先准备一套蛋白电泳设备，蛋白质样品和marker上样到凝胶孔中，设置电压，启动电泳程序。通常样本中会添加一种还原剂，如巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)(在洗涤剂的存在下，如SDS），可以打开折叠蛋白质的二硫键；而样本中加入的SDS洗涤剂可以给所有蛋白质加上负电荷，从而将它们线性化成多肽。聚丙烯酰胺则是多肽电泳分离的介质。多肽在电场的作用下向阳极方向泳动。

蛋白电泳的迁移率与一下三个因素有关：

①　形状---所有的蛋白质在用还原剂处理后都处于一级结构中。 因此，形状不影响蛋白质的分离。

②　电荷---经过SDS处理后，所有的蛋白质都是负电荷，