MIT Molecular Biology 笔记6 转录的调控

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教材 Molecular biology of the gene 7th edition  J.D. Watson et. al

转录的调控

原核生物的转录调控

一、转录调控原理

1、基因表达由调控蛋白控制

• 激活因子 activator
• 抑制因子 repressor

　　它们通常都是DNA结合蛋白

2、大多数的激活因子和抑制因子在转录起始水平发挥作用

　　①协同结合

• 本底水平basal level（组成型表达constitutive expression）
  • 聚合酶在偶然状态下自发结合启动子引起的表达
• 激活因子就是促进聚合酶和启动子的结合
  • 激活因子的一个表面结合启动子附近DNA位点，另一表面结合聚合酶，将聚合酶募集（recruitment）至启动子附近
  • E'coli就是这种方式
• 抑制因子结合与聚合酶重合的地方抑制转录（操纵子operator）

　　②变构

• 激活因子 刺激聚合酶 形成开放复合体 （glnA启动子中 NtC)
• 激活因子 引起 启动子DNA构象改变 开放复合体 (merT启动子中 MerR）
• 抑制因子 抑制逃离 （malT基因表达）

　　③远程激活

• 通过弯曲环化较远距离激活，或者阻碍激活

　　蛋白与DNA的特异性结合依赖helix-turn-helix与大沟的作用

　　协同结合和变构在调控中起到多种作用

• 信号的整合
• 特异信号控制调控因子

 　　** 抗终止作用及其延续：基因调控不仅局限于转录起始调控

二、原核生物转录起始的调控

1、

 

• 激活因子 Cap（catabolic activator protein） 
  • 是一种cAMP受体蛋白
• 抑制因子 Lac抑制因子
  • 结构性表达
•  
• 葡萄糖缺乏时，Cap相应，结合上游位点
• 乳糖充足时， lac抑制因子没有活性

 

 

 

 

2、大概的机理

• Cap促进RNA聚合酶结合lac启动子
  • Cap招募聚合酶
  • lac基因缺乏-35 区，拥有UP-element
  • Cap二聚体的结合位点位于大约-60区（UP-element）
• Lac repress 抑制聚合酶结合 
  • Lac repress 占据了聚合酶的结合位点

lac启动子缺乏-35 区，拥有UP-element，这是激活因子控制的启动子的典型特征

3、Cap的结构：具有独立的激活表面和DNA结合表面

 

•  CAP-αCTD-DNA形成三聚体才能激活转录

正控制 ：Positive control，PC

研究此问题时，一个CAP与RNA聚合酶接触的激活区氨基酸发生替换的突变体叫做正控制突变体

 

 

转录因子旁路实验证明了激活因子仅是协助聚合酶结合启动子

• CAP与αCTD 被换
• αCTD被换成DNA结合物（CAP）
• 增加聚合酶浓度

 4、调控因子（包括CAP和Lac抑制因子） 以结构模体结合DNA

• 蛋白质以同源二聚体形式结合到反向重复序列位点上
• 每一个单体结合一个半位点
• 这一种结合依靠 helix-turn-helix识别特异DNA序列
  • 一个α螺旋嵌入大沟
  • 另一个α螺旋横跨大沟与主链相联系处
  • 如此保证识别螺旋出现在正确位置，增加相互作用结合能

　　特殊地

• Lac 以四聚体的方式结合，出现环化
• helix-turn-helix 外区域也会与DNA互作
• 蛋白质可能导致DNA弯曲
  
  

 

5、Lac repress 与 CAP 的活性由信号触发的变构控制

• Lac repress
  • 细胞本底表达lacZ编码的半乳糖苷酶
  • 乳糖lactose进入细胞内 异构成别乳糖
  • 别乳糖 使得 Lac repress 变构 失活
• CAP
  • 葡萄糖glucose 减少， cAMP增多
  • cAMP 与 CAP形成复合物， 变构，活化，结合DNA