流式双染凋亡率的计算_Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测方法

一、概述

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期，膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。

AnnexinV是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

因此，将Annexin V与PI联合使用时，PI 则被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。

图Annexin V 检测细胞凋亡原理

二、试剂盒组份产品名称规格

Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I100tests

产品组成成分：

Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E)

Annexin V-FITC (51-65874X)

Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)

三、实验步骤

贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可