凋亡比例计算 流式_人参皂苷Rg3协同TRAIL促进肺癌H358细胞凋亡的机制

本文是由锦州医科大学附属第一医院安辉等人开展的机制研究，为了探讨人参皂苷Rg3联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肺癌H358细胞凋亡的影响及其作用机制。研究表明人参皂苷Rg3联合TRAIL能够协同抑制肺癌H358细胞的增殖及诱导细胞凋亡，其作用机制可能与人参皂苷Rg3协同促进DR5及caspase-8的表达上调有关。

方法及观察指标

(1)MTT法检测肺癌H358细胞的增殖能力

取对数期生长的肺癌H358细胞，胰酶消化，调整细胞密度至5×10⁴/ml，接种于96孔板中，37℃、5%CO2条件下培养。按0、50、100、200ng/mlTRAIL或0、25、50、100μmol/LRg3添加，每个浓度设4个平行孔。各组作用48h后，每孔加入质量浓度为5mg/mlMTT20μl，继续培养4h。吸去培养液，每孔加入150μlDMSO，避光，振荡10min，室温孵育20min。放入酶标仪，以490nm波长检测光密度(D)值。细胞增殖率=(实验组D值/对照组D值)×100%。实验重复3次。

(2)DAPI染色荧光显微镜观察肺癌H358细胞的形态学变化

取对数期生长的细胞，胰酶消化，调整细胞密度至3×105/ml，接种于12孔板中，每孔1ml，37℃、5%CO₂条件下培养。药物作用48h后，用PBS洗3次。4%多聚甲醛固定5min，室温干燥。每孔加入2μg/mlDAPI0.5ml，37℃避光15m