凋亡比例计算 流式_人参皂苷Rg3协同TRAIL促进肺癌H358细胞凋亡的机制

本文是由锦州医科大学附属第一医院安辉等人开展的机制研究,为了探讨人参皂苷Rg3联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肺癌H358细胞凋亡的影响及其作用机制。研究表明人参皂苷Rg3联合TRAIL能够协同抑制肺癌H358细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其作用机制可能与人参皂苷Rg3协同促进DR5及caspase-8的表达上调有关。

方法及观察指标

(1)MTT法检测肺癌H358细胞的增殖能力

取对数期生长的肺癌H358细胞,胰酶消化,调整细胞密度至5×104/ml,接种于96孔板中,37℃、5%CO2条件下培养。按0、50、100、200ng/mlTRAIL或0、25、50、100μmol/LRg3添加,每个浓度设4个平行孔。各组作用48h后,每孔加入质量浓度为5mg/mlMTT20μl,继续培养4h。吸去培养液,每孔加入150μlDMSO,避光,振荡10min,室温孵育20min。放入酶标仪,以490nm波长检测光密度(D)值。细胞增殖率=(实验组D值/对照组D值)×100%。实验重复3次。

(2)DAPI染色荧光显微镜观察肺癌H358细胞的形态学变化

取对数期生长的细胞,胰酶消化,调整细胞密度至3×105/ml,接种于12孔板中,每孔1ml,37℃、5%CO2条件下培养。药物作用48h后,用PBS洗3次。4%多聚甲醛固定5min,室温干燥。每孔加入2μg/mlDAPI0.5ml,37℃避光15m

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