单体预聚合的目的是什么_通过高通量筛选工程聚合物赋形剂获得超快胰岛素制剂...

全世界有4000多万1型糖尿病患者，他们依靠每天皮下注射胰岛素或胰岛素泵进行胰岛素替代治疗。这些患者无法产生促进细胞葡萄糖摄取所需的胰岛素，必须在进餐时提供计算好的胰岛素，以防止血糖升高。不幸的是，目前胰岛素制剂的药代动力学并不模拟内源性胰岛素分泌，在非糖尿病患者中，胰岛素分泌可在30分钟内达到峰值浓度。即使是目前设计用于进餐丸的速效胰岛素(RAI)类似物也表现出20至30分钟的延迟作用，60至90分钟的峰值作用，以及3至4小时的总作用持续时间。这些动力学是胰岛素分子在配方中混合结合状态的结果。商业胰岛素制剂通常含有胰岛素六聚体、二聚体和单体的混合物。注射后，单体被迅速吸收到血液中，二聚体和六聚体因其大小而吸收得更慢，必须分解成单体才能变得活跃。此外，胰岛素作用时间的延长会使控制餐后血糖偏移变得困难，并增加低血糖的风险，因为即使在餐时葡萄糖负荷通过后，胰岛素仍会留在体内。

为了更好地控制进餐时血糖，需要一种从皮下迅速吸收的胰岛素配方，以更接近于内源性餐后胰岛素分泌。单体胰岛素制剂可以加快起效时间和缩短作用时间，从而通过消除皮下储存的六聚体胰岛素来降低餐后低血糖的风险。然而，单体胰岛素在配方中不稳定，迅速聚集成淀粉样纤维，这些纤维既不活跃又具有免疫原性。目前，锌和酚类防腐剂通常用作胰岛素制剂中的赋形剂，因为它们促进胰岛素六聚体形成的倾向使它们能够充当稳定剂。开发一类能够改善胰岛素单体状态下稳定性的赋形剂对于开发一种可行的超快速胰岛素制剂至关重要。胰岛素聚集通常发生在疏水界面，如气液界面，其中单体在吸附后发生部分展开，并可形成淀粉样纤维。负责聚集的疏水部分通常在二聚和六聚缔合状态下被屏蔽，使得单体状态最容易聚集。目前用于单体胰岛素稳定的无锌方法依赖于通过共价或非共价地将亲水性聚合物，如聚乙二醇(PEG)或海藻糖糖类聚合物直接连接到胰岛素上来屏蔽疏水相互作用。这些方法在配方中稳定胰岛素，但它们会导致体内循环时间增加，这对于超快速作用胰岛素制剂是不可取的。

胰岛素稳定的另一种方法是利用两亲性聚合物占据界面的倾向，阻止胰岛素与界面的相互作用。泊洛沙姆是聚合物表面活性剂的一个例子，已用于改善商业胰岛素制剂的稳定性(Insuman U400，赛诺菲-安万特)。然而，这些目前的赋形剂包含有限的化学空间，表现出在溶液中形成微结构(如胶束)的倾向，并且容易在高浓度下转变为凝胶，因此，稳定的超快单体胰岛素配方仍然是不可能的。在这项研究中，科学家的目的是合成一类独特的赋形剂，可以用来使超快速作用单体胰岛素的稳定配方。这些赋形剂是由一种水溶性载体单体和一种功能性掺杂单体组成的合成共聚物，该单体可用于筛选目前表面活性剂赋形剂尚未开发的广阔的化学空间。假设掺杂单体可以促进聚合物界面的相互作用，减少界面处胰岛素-胰岛素的相互作用，从而提高胰岛素的稳定性。使用精确的高通量合成和可逆的附加碎片转移(RAFT)聚合，生成了100多种丙烯酰胺载体/掺杂共聚物(AC/DC)赋形剂库。在此，他们证明最佳AC/DC赋形剂可使单体胰岛素lispro的稳定配方成为可能，并且这种超快吸收的lispro(UFAL)配方在胰岛素缺乏型糖尿病猪模型中的药代动力学比商用速效胰岛素制剂快两倍。

       在这项研究中，报告了一种稳定的UFAL配方，它使用AM基共聚物作为单体胰岛素的稳定赋形剂。由于其水溶性和生物相容性，PEG聚合物传统上被用于药物递送，但最近关于免疫原性的关注开始限制其使用。相比之下，AM共聚物正在成为药物输送系统的替代生物材料，因为许多此类共聚物已被证明是无毒的，并且在生理条件下比PEG基赋形剂更稳定。通过对一个基于AM的共聚物赋形剂组合库的高通量筛选，他们确定了几种作为胰岛素制剂简单稳定剂的候选共聚物。这些共聚物在没有任何蛋白质修饰作用的情况下提高了胰岛素制剂的稳定性，从而消除了胰岛素活性降低或循环时间延长的问题，这些问题通常与共价胰岛素修饰(聚乙二醇化)有关。假设由水溶性载体单体和功能性掺杂单体组成的统计共聚物将作为稳定赋形剂，以减少胰岛素与气液界面的相互作用，从而阻止胰岛素聚集，并使胰岛素以单体形式稳定地形成并具有超快动力学体内。单体胰岛素配方包含我们最优秀的赋形剂MORPH-NIP23%，在压力老化下稳定超过24小时，这几乎是商业Humalog的四倍。在糖尿病猪中，这种UFAL制剂表现出超快的药代动力学，与使用相同胰岛素分子lispro的商业RAI制剂Humalog相比，起效时间快两倍，暴露时间短两倍。这些结果表明，这种UFAL配方更接近于健康人的内源性胰岛素分泌，并强调这种配方有助于加强糖尿病管理。甚至在目前的“速效”胰岛素配方中观察到的药代动力学的逐步改善(Fiasp是诺富洛(商业用阿斯巴特制剂)的一种更快的版本)，也显示出了许多临床益处。尽管Fiasp显示与RAI配方相比，Fiasp在峰值作用时间和作用持续时间方面有适度的缩短，但是，Fiasp的使用减少了糖尿病患者餐后血糖偏移，降低了血红蛋白A1c浓度。相比之下，在糖尿病猪身上，胰岛素的药代动力学速度是人类的两倍，UFAL与Humalog相比，峰值暴露时间缩短了16分钟，暴露时间缩短了26分钟。在糖尿病猪身上观察到的结果，结合预测人类UFAL药代动力学的模型，表明UFAL可能具有在可注射胰岛素制剂中前所未有的吸收动力学。如果在人类临床研究中得到了实现，那么这些动力学将接近Afrezza的超快动力学，一种商用可吸入胰岛素。然而，与Afrezza不同的是，UFAL是一种可注射制剂，它能够实现更精确的给药方案以及与泵和闭环系统的兼容性，为UFAL提供了改善糖尿病患者餐后血糖控制的潜力。这些研究共同确定了一种有前途的用于蛋白质稳定的共聚物赋形剂，并展示了其在稳定UFAL配方中的效用。这项研究的局限性在于，除非UFAL被转化到临床上，否则除了预测模型之外，无法知道UFAL在人体内的真实药代动力学。猪是皮下药代动力学的良好模型；然而，胰岛素在猪体内的作用时间仍然比在人类身上观察到的短(猪2小时对人类4小时)。最终，猪的这些更快的吸收动力学可能掩盖了Humalog和UFAL之间血糖消耗的差异，并可能解释了本研究中配方之间缺乏观察到的药效学差异(血糖)。此外，尽管在本研究中进行的初始细胞毒性和生物相容性实验表明，该共聚物赋形剂具有很好的毒性，但临床转化需要对MORPH-NIP23%生物相容性进行严格研究，并检查制剂的免疫原性。稳定的超快胰岛素配方有可能改善糖尿病管理，并减轻患者在用餐时血糖管理方面的负担。

原文及图片来自：doi:10.1126/scitranslmed.aba6676