tunel凋亡试剂盒说明书_TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒使用说明书.PDF

TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒使用说明书.PDF

TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒使用说明书

(通用型，适用于细胞、组织样本)

【试剂组成】

组 份 规格：20T 规格：50T 规格：100T 储存条件

平衡液 1.0 mL 2.5mL 5.0 mL -20℃

TdT酶 80μL 200μL 400μL -20℃

50×蛋白酶K 40μL 100μL 200μL -20℃

Streptavidin-HRP 10μL 25μL 50μL 4℃避光

Biotin-dUTP 20μL 50μL 100μL -20℃

DAB 2mg 5mg 10 mg -20℃避光

【技术背景】

TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是用来检测细胞在凋亡过程中细胞核DNA的断裂情况，其原理细

胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡

时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNAladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH

可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TerminalDeoxynucleotidylTransferase,TdT)的催化下加上生

物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin

(Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普

通光学显微镜检测到凋亡的细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有

3'-OH形成，很少能够被标记。这就是TUNEL(TdT-mediateddUTPNick-EndLabeling)法检测细

胞凋亡的原理。

本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原

位检测。

【注意事项】

① 使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。

② 因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心集液。

③ 为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。

④ TdT酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免

每个样本单独配制而产生的试剂损耗。

⑤另因DAB为固体粉末，使用前加入适量PBS 溶解，配制成20×DAB(10 mg/ml)后，按

下述方法显色使用。

⑥用户自备：二甲苯、多聚甲醛、甲醇、乙醇、PBS、H2O2 、TritonX-100、柠檬酸钠、复染

染液：苏木素或甲基绿等；盖玻片、载玻片、染色缸、染色湿盒、光学显微镜、37℃孵箱、

移液器等。

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【样本预处理】

TUNEL检测时样本的预处理是试验的关键所在，本说明书推荐的条件仅为普遍情况，用户需

根椐自已的样本材料及首次试验结果来调整各个条件，如处理时间、处理浓度等，来优化出适合

自身样本的试验条件，从而做出客观的试验结果。

1、对于细胞样本

a、 把准备好的细胞涂片或爬片自然晾干。

b、 把晾干的样本浸入固定液，室温(15-25℃)固定15-60min。

(固定液的配制：4%多聚甲醛溶于PH7.4的PBS中，需新鲜配制)

c、 把固定好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min。

d、 把c步处理好的样本浸入封闭液中，室温(15-25℃)封闭10min。

(封闭液的配制： 3%HO溶于无水甲醇)

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e、 把d步处理好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min。

f、 把e步处理好的样本浸入通透液中，冰上(2-8℃)促渗2min。

(通透液的配制：0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，