3蛋白wb_【Western-Blotting】WB核心理论：抗原抗体特异性反应

在《谁发明了Western-Blotting？》中我们提到，Western-Blotting（WB）起源于核酸印迹——Southern Blotting和Northern Blotting，二者的基本原理是通过琼脂凝胶，将分子量不同的DNA和RNA分离，然后转膜及用特异性探针检测。与其类似，目前被广泛应用的WB方法也是用SDS-PAGE胶将不同分子量的蛋白分离，然后用特异性抗体（一抗和二抗）检测特定的蛋白。之所以能用WB检测目的蛋白，其核心理论就是特异性抗体与目的蛋白之间的抗原抗体特异性反应。本质上讲，WB所用的特异性一抗二抗和我们要检测的目的蛋白都属于蛋白质。

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。在机体内，当免疫细胞被抗原激活后，由B细胞分化成熟为浆细胞后所合成、分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白（immunoglobulin，Ig），激活补体系统从而解除抗原对机体的损伤。

Ig是由两条相同的轻链（L链）和两条相同的重链（H链）通过链间二硫键连接而成的四肽链“Y”字型结构。每条L链由可变区（variable region）和恒定区（constant region）组成；每条H链也有可变区和恒定区组成，其中恒定区可分为三个结构域。从N-端起，H链的1/4肽段及L链的1/2太短在各类Ig的排列顺序可变性大，称为可变区（V区），其功能是决定不同Ig与抗原结合的特异性。Ig可分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五类，IgG分子结构图见下。由于抗原、抗体在结构上具有相互识别相互嵌合的构象，