实验技术
暮涩
这个作者很懒,什么都没留下…
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KM小鼠大脑海马区生理切片HE染色
HE染色是一种研究细胞形态学的方法,采用碱性染料苏木精和酸性染料尹红分别与细胞核和细胞质发生作用,使细胞的微细结构通过颜色而改变折射率,从而在光镜下能清晰地呈现出细胞图像。该法能提供良好的核浆对比染色,是细胞化学染色方法中最常用的一种染色方法。培养细胞的HE染色过程与组织切片的染色过程基本相同,包括样品制备、染细胞核、染细胞质、脱水、透明和封固等步骤,但培养细胞的样品制备有其特点,贴壁生长的细胞常...原创 2018-11-09 22:46:15 · 16107 阅读 · 0 评论 -
荧光免疫染色之抗体的选择
二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也会有不同的检测方案,因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求荧光二抗1【一抗的种属来源】 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗...原创 2019-03-22 15:04:55 · 5872 阅读 · 0 评论 -
缓冲液的配制(PBS与PBST)
磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法0.01M PBSPBS 135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4,pH 7.2 PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L称7.9g NaCl,0.2g KCl,0.24...原创 2019-03-22 09:55:16 · 40713 阅读 · 0 评论 -
免疫荧光二之技术详解
免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术(比如流式细胞仪)测定含量。免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、...原创 2019-03-21 22:11:43 · 3350 阅读 · 0 评论 -
免疫荧光染色
细胞免疫荧光染色(培养板中染色)1.固定:培养的细胞,弃去培养基,冷的PBS洗两次,首先用4%多聚甲醛(4孔板200μl)固定10min,PBS洗2次,每次5-10分钟。2.在含0.1% Triton X-100(4孔板200μl)的PBS中进行10min的透膜处理,PBS洗2次,每次5-10分钟。手动轻轻晃动数次,吸尽液体。3.羊血清用PBS配制成4%羊血清封闭液,室温封闭(4孔板200μ...原创 2019-03-20 22:11:43 · 10859 阅读 · 36 评论 -
细胞培养中的一些问题
我们用二氧化碳细胞培养箱培养的PC12和SY5Y细胞,原来提供二氧化碳气的公司不靠谱,换了天津市一家大型正规的气体公司。由于气体公司离我实验室距离较远,本应在周一送到的气体延迟到了周二。为了尽量减少气体的损耗,尽量减少操作。周一观察发现,SY5Y长势旺盛,几乎铺满了瓶底,密度达95以上,理应传代。因气体未到位,没有传代。昨天气体到了以后,观察发现:PC12成团漂浮死亡,SY5Y量缩减至月50%且油...原创 2019-01-09 11:53:52 · 922 阅读 · 0 评论 -
神经递质及其检测
儿茶酚胺类物质:儿茶酚胺由肾上腺髓质,及肾上腺神经元及肾上腺外嗜铬体分泌的激素,包括肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺和多巴。多巴胺:dopamine(DA),是一类儿茶酚胺类物质,它存在于神经组织及体液中,是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质,脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系,导致神精功能紊乱,是帕金森病发病的一个重要影响因素【1】这种脑内分泌物和人的情欲、感...原创 2019-01-09 11:12:50 · 5306 阅读 · 0 评论 -
细胞培养--消化
距上次写的博客已经9天了,这就九天里写了一份近9000字的开题报告,完成了开题答辩,冻存了一批细胞,PC12和SY5Y仍在增殖中,参加了中国康复医学综合年会。先来说说细胞培养的相关情况:SY5Y细胞长势良好,来到天津的第二天就1:3传代了一次,传代后生长旺盛。北京细胞中心发送细胞的培养瓶是装满培养液的,收到细胞后,把培养液收集了起来,并用这些培养液培养了第一批冻存的细胞。这样做的目的是为了保存一...原创 2018-11-18 20:58:10 · 1977 阅读 · 0 评论 -
生医竞赛、论文修改
昨日上午组会 ,大老板和研二的同学们讨论开题报告。我的题目为重复经颅磁刺激对神经元功能影响的体外研究实验。在老龄化社会下,神经系统疾病多发为背景,建立拟神经细胞模型探讨重复经颅磁刺激对精神系统疾病症状的改善。这是磁生物学效应大方向下的具体研究。我校电气学科是国家重点学科,入选国家“世界一流学科”名单,在电气的背景下,衍生出生物电工方向。2002年开始本科招生,2003拥有一级硕士点,2018年获批...原创 2018-11-08 22:06:49 · 320 阅读 · 0 评论 -
双标免疫荧光技术操作要点
一、免疫荧光技术中标本制作的基本程序近似于酶免疫组化,不同点如下:1、免疫荧光不需要使用双氧水处理,封闭和一抗孵育与其相同。2、免疫荧光的二抗使用不同荧光标记的二抗孵育,孵育时间根据抗体的工作浓度确定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可贴片、封片和观察。4、免疫荧光在封片时常使用专用封片剂或甘油:0.01M PBS (1:1)。条件许可,建议购买抗淬灭的封片液,使标本可以保存更久。5、荧光抗...原创 2019-03-23 15:53:44 · 2526 阅读 · 0 评论