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近来身体微恙,昨日尤甚。上午给PC12细胞换了溶液,从9.17号养细胞天以来,一直不理想。查阅的材料显示PC12细胞贴壁疏松,我们养的这批细胞大部分贴壁铺开生长。同时复苏的两支细胞,状态不一。一支光滑透亮,很漂亮;另一只细胞边缘粗糙,有黑色颗粒状物体附着在细胞表面。培养基用1640+10%FBS,生长状态极差,越养越少,直到10.26换了血清(查阅北京协和细胞中心:1640+10%+5%FBS)之后,细胞状态好转。第2-3d增殖明显,一开始是链状生长,后来铺成一小团。因为我经验不足,这次是在导师的指导下进行操作,有两个步骤印象深刻:水浴锅融化的细胞,要用移液枪将其吸取至离心管内;将培养液倒掉后,加入胰酶消化后,不用把胰酶倒掉,而是加入新鲜的培养基移至离心管中离心(如果将胰酶倒掉,会损失一部分细胞)。
下午收到北京协和细胞中心的信息,已将人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)由顺丰发出.这批SY5Y细胞是09.28订购的,真的是千呼万唤始出来。晚上做了些准备工作:清点操作工具,移液枪枪头、玻璃细胞培养瓶、玻璃滴管、200ml玻璃瓶等。因为要求无菌处理,所以有些已经处理过但超过两周的需重新处理。且SY5Y细胞所需培养液成分为1640+15%FBS,要重新配。将已经过期的器具,重新高压灭菌后烘干备用。已使用的器具重新清洗泡酸再高压灭菌。
做细胞实验,要有无菌意识,这需要时刻牢记并慢慢培养。
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