SH-SY5Y培养

6日收到SY5Y细胞后，将完全培养基吸出保存在4℃环境下，培养瓶内留有5ml供细胞生长。中午观察，SY5Y的密度在80%左右，放至二氧化碳培养箱（37℃，5%二氧化碳）培养。因细胞昨日5号从北京协和细胞中心邮寄出，次日到达天津，运输过程中的环境不利于细胞的生长，因此细胞需要一段是时间自我恢复（几个小时至24H不等）。下午6时左右（收到细胞后大约7小时），细胞状态良好，密度增加。这只细胞很坚挺。昨天晚上观察细胞：密度进一步增加，有细胞出现凋亡。今天上午进行1：3传代。此次传代，根据北京细胞中心提供的材料，使用含有EDTA的胰酶消化，约30S细胞成块脱落，这说明消化过度。含有EDTA的胰酶消化能力强，下次传代应注意缩短消化时间。消化过度，细胞成块脱落，不易吹散。传代后，成团的细胞不利于营养物质的获取和代谢废物的排出，严重影响增殖，甚至导致凋亡。下午5时观察，细胞均已铺开贴壁，密度较大，状态良好。为保险起见，在最初的培养中，使用的培养也是细胞中心邮寄来的完全培养液。使用完毕后，得自己配：1640+15%灭活FBS+1%双抗+1%谷氨酰胺。今天已将FBS在56℃水浴锅中放置35分钟（老板说放35分钟，北京协和细胞中的人说30min）进行灭活。本来FBS冻存的，需在室温下恢复室温，方可放置于56℃的水浴锅中。今天已将泡酸的玻璃培养瓶、滴管、200ml玻璃瓶和尖底玻璃离心管清洗并高压后风干。
介绍下SH-SY5Y:中文名称人神经细胞母细胞瘤细胞，该细胞分化低、繁殖快、细胞形态、生理和生化功能与正常神经细胞相似。被广泛应用于神经系统疾病发病机制研究和药物作用机制方面的研究[1]。该细胞可以产生儿茶酚胺和多巴胺，磁刺激的频率和时间显著影响儿茶酚胺的代谢！而儿茶酚胺与抑郁症有关，因此，有人对体外培养的SH-SY5Y施加rTMS，探究rTMS可能存在的对抑郁症的影响[2]。该细胞还可以表达淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protern）和β淀粉样蛋白（β-amyloid ）[3]。这个两种蛋白与AD的发病机制有关。
[1] 冯波, 王蓉, 盛树力. 神经退行性疾病研究中拟神经细胞模型:人神经母细胞瘤株SH-SY5Y的来源特性及应用[J]. 中国组织工程研究, 2006, 10(06):129-131.
[2] Uri Shaul, Dorit Ben-Shachar, Rachel Karry Modulation of frequency and duration of repetitive magnetic stimulation affects catecholamine levels and tyrosine hydroxylase activity in human neuroblastoma cells: implication for the antidepressant effect of rTMS.International Journal of Neuropsychopharmacology (2003), 6, 233–241
[3] 徐松, 高顺宗, 刘雪平,等. 糖基化终末产物对人神经母细胞瘤细胞APP表达及Aβ生成的影响[J]. 卒中与神经疾病, 2011, 18(2):67-71.