杨树叶盘法遗传转化

参考文献

1、Wang H, Wang C, Liu H, Tang R, Zhang H. An efficient Agrobacterium-mediated transformation and regeneration system for leaf explants of two elite aspen hybrid clones Populus alba × P. berolinensis and Populus davidiana × P. bolleana. Plant Cell Rep. 2011;30:2037–44.

2、Xia, Y., Cao, Y., Ren, Y. et al. Effect of a suitable treatment period on the genetic transformation efficiency of the plant leaf disc method. Plant Methods 19, 15 (2023). https://doi.org/10.1186/s13007-023-00994-3

一、主要步骤

        1、预培养3天

        2、菌液重悬至OD600≈0.6，侵染15min

        3、共培养2天

        4、筛选培养

        5、生根筛选

二、本实验室方法（所有培养基PH=5.8-6）

（一）体系一

        1、预培养培养基

                MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/LNAA+7g/L琼脂+30g/L蔗糖

        2、菌液重悬至OD600≈0.6

                重悬液：1/2MS+30g/L蔗糖+100uM AS

        3、共培养培养基

                84k预培养基+100uM AS

        4、筛选培养

                84k预培养基+25mg/L kana+200mg/L 特美汀

        5、生根筛选

                1/2MS+IBA0.05mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖20g/L+25mg/L kana+200mg/L 特美汀

（二）体系二（南农）

         1、预培养培养基

                MS+7g/L琼脂+30g/L蔗糖               

        2、菌液重悬至OD600≈0.6

                重悬液：1/2MS+20g/L蔗糖+100uM AS

        3、共培养培养基

               MS+0.1mg/L 6-BA+0.05mg/LNAA+0.002mg/L TDZ+7g/L琼脂+30g/L蔗糖+100uM AS

        4、筛选培养（25mg/L kana+200mg/L 特美汀）

                MS+0.1mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+0.002mg/L TDZ+7g/L琼脂+30g/L蔗糖

        5、生根筛选（25mg/L kana+200mg/L 特美汀）

                1/2MS+0.05mg/L IBA+0.05mg/L NAA +蔗糖20g/L

（三）体系三（夏新莉）

        1、预培养培养基

                MS+0.5mg/L 6-BA+0.002mg/L ZT+20g/L 蔗糖+6.5g/L 琼脂             

        2、菌液重悬至OD600≈0.6

                重悬液：MS+0.4mg/L 6-BA+0.002mg/L ZT+20g/L蔗糖

        3、共培养培养基

               MS+0.8mg/L 6-BA+0.004mg/L TDZ+30g/L蔗糖+6.5g/L 琼脂+120mg/L AS

        4、出芽培养基

                MS+0.8mg/L 6-BA+0.004mg/L ZT+20g/L蔗糖+6.5g/L 琼脂+100mg/L Cef

        4、筛选培养（100mg/L Cef+1mg/L Hyg）

                MS+0.2mg/L 6-BA+0.002mg/L TDZ+6.5g/L琼脂+20g/L蔗糖

        5、生根筛选（100mg/L Cef+1mg/L Hyg）

                MS+20g/L蔗糖+6.5g/L 琼脂

（四）体系四（康向阳）

        1、预培养培养基

                MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+20g/L 蔗糖+6.5g/L 琼脂             

        2、菌液重悬至OD600≈0.6

                重悬液：无

        3、共培养培养基

               MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L 琼脂+120mg/L AS

        4、筛选培养（30mg/L kana+200mg/L 特美汀）

                MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+6.5g/L琼脂+20g/L蔗糖

        5、生根筛选（30mg/L kana+200mg/L 特美汀）

                1/2 MS+30g/L蔗糖+0.05mg/L IBA+0.02mg/L NAA+6g/L 琼脂

（五）体系五（王君安新民）

 1、预培养培养基

                MS+0.8mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+20g/L 蔗糖+5g/L 琼脂             

        2、菌液重悬至OD600≈0.6

                重悬液：无

        3、共培养培养基

               MS+0.8mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L 琼脂+120mg/L AS

        4、筛选培养（30mg/L kana+200mg/L 特美汀）

                MS+0.8mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+6.5g/L琼脂+20g/L蔗糖

        5、生根筛选（30mg/L kana+200mg/L 特美汀）

                1/2 MS+30g/L蔗糖+0.05mg/L IBA+0.02mg/L NAA+6g/L 琼脂