高效液相色谱法(HPLC)是一种用于分离、鉴定和量化混合物中的各组分的分析技术,利用色谱柱对混合物进行分离,然后用光谱法进行鉴定和定量。在20世纪60年代,采用低压玻璃柱的柱色谱LC进一步发展为采用高压金属柱的高效液相色谱HPLC。因此,高效液相色谱法基本上是一种高度改进的柱液相色谱法。溶剂不是在重力作用下通过色谱柱,而是利用高达400个大气压的输液泵送入色谱柱。
HPLC工作原理
混合物各组分通过与固定相、流动相之间的相互作用,在色谱柱中进行分离纯化;
固定相是存在于色谱柱中一种非常小的多孔颗粒材料,流动相是在高压迫使下通过色谱柱的一种溶剂或混合溶剂。用注射器注入样品,通过一个连接样品回路的阀门,使样品与流动相混合,随后样品中各组分以不同的速率通过色谱柱,由于各组分与固定相之间的吸附能力不同,各组分依次流出色谱柱,通过合适的检测器将组分浓度转换成电信号传递到计算机的HPLC软件上。运行结束后,在HPLC软件中就可以得到色谱图。
HPLC仪器组成