FITC-N3(Fluorescein Isothiocyanate Azide)可以用于偶联蛋白质,实现蛋白质的荧光标记。以下是一种常用的方法:
**1. 准备偶联反应体系:**将目标蛋白质溶解在适当的缓冲液中,并确保pH适合蛋白质的稳定性。根据实验需求,可以在反应体系中添加一些辅助剂,如还原剂(如二巯基乙醇)或载体蛋白(如牛血清白蛋白,BSA),以提高偶联效率和稳定性。
**2. 激活FITC-N3:**在偶联反应前,需要激活FITC-N3。将FITC-N3溶解在适当的溶剂中(如DMF、DMSO等),制备激活溶液。将激活溶液加入到目标蛋白质溶液中,并充分混合。
**3. 反应条件和时间:**在合适的温度下,允许FITC-N3与目标蛋白质发生偶联反应。反应时间可以根据实验要求和蛋白质的特性进行优化,通常在数小时到过夜之间。
**4. 停止反应:**当反应时间达到后,使用适当的方法停止偶联反应。例如,可以通过添加一些还原剂(如二巯基乙醇)来中和剩余的FITC-N3。
**5. 纯化和储存:**对偶联反应混合物进行纯化,去除未反应的FITC-N3和其他杂质。常见的纯化方法包括凝胶过滤、离心过滤或亲和层析。纯化后的偶联产物可以在适当的缓冲液中进行储存,避免光照和低温保存,以保持其稳定性和荧光性能。
需要注意的是,在进行蛋白质偶联反应时,应根据蛋白质的特性和实验需求进行优化和调整反应条件。确保选择适当的控制组和实验对照,以验证偶联反应的特异性和准确性。
CY5-DEX MW:10K
Avidin CY5.5(2mg/ml)
Streptavidin-CY3
Avidin-ICG
CY7-Dextran MW:5K
Mal-PEG2K-cyclo(RGDfk)
cy5.5-PEG2000-SH
CY7.5-Dextran MW:10K
PCL2K-PEG2K-CY7
BSA-CY3(低偶联率)
BSA-CY3(高偶联率)
本篇图文信息均由【星戈瑞stargraydye】小编提供,如需了解详细烦请联系!