关于一代测序中双峰的问题

分子生物中，一代测序（sanger）在DNA测序中起着至关重要的作用。

一般在高通量测序后，都需要经过一代测序的验证。

比如全基因组测序，转录组测序等。

通过这些测序获得一些重要的信息，如肿瘤基因突变筛选，微卫星筛选等。

市面上常见的一代测序公司，目前占据市场较大的外包公司有，北京擎科生物股份有限公司，以及上海生工测序这两家公司。还有一些其他的，就不再此列举。大家有需求的话，可以联系两家公司的官网进行下单，方便快捷。值得信赖。

那么在进行一代测序的时候，是否经常遇到很多问题，常见的就是测序双峰的问题。估计让很多科研狗们都相当难受。

在此，为你们分享一些我的经验。

1，当出现双峰的时候，先打开峰图查看。不要盲目的只看序列。常见峰图打开软件有seqscanner，chromas等

2.查看峰图从什么地方开始出现套峰。如果从最开始就出现套峰，我们要考虑是不是模板的问题，或者扩增产物不特异，或者引物匹配出错。

如果测序一部分后才开始出现双峰，查看峰图，是否含有特殊结构，如poly结构，重复单元结构等。

如果没有这些结构依旧出现套峰，考虑是否存在碱基的突变，如缺失，插入，杂合等情况。

如这些依旧没有，我们更深入的考虑下，基因本身存在一定的多拷贝，这种也会出现双峰，常见的如16s，its等基因。

总之，需要根据自己的实验进行合适的分析。合理的理解，不要动不动就责怪测序公司，这种在身边的科研人员太多了，很多自己做不好，把责任推给三方公司的大有人在，我们应该秉承严谨科学的态度，科学的考虑问题，解决问题。