液相/气象色谱仪原理

色谱仪

1.液相色谱

常用的是柱色谱

高效液相色谱

在 HPLC 系统中，** 色谱柱内的固定相通常是由颗粒很细的填充物组成。这些细小的填充物具有更大的比表面积，能够提供更多的与样品分子相互作用的机会，从而提高分离效率和分辨率 **。然而，较细的填充物同时也增加了流动相通过色谱柱时的阻力，因此需要通过增加压力来推动流动相顺利通过色谱柱。

HPLC 系统的压力通常高达几百至几千 psi（磅力/平方英寸），这比普通的液相色谱要高得多，而传统液相色谱通常依赖重力或低压系统，分离效率相对较低。高压推动流动相的方式能够加速分离过程，并且允许更细的填充物在色谱柱中使用，从而提高了分离效率和分析速度。

液相色谱仪构造

1. 流动相供应系统

这部分负责提供流动相，将其从储存瓶中泵入色谱系统。流动相的作用是携带样品通过色谱柱，在流动相和固定相之间发生分配或吸附的相互作用，实现样品组分的分离。

• 储液瓶：储存流动相溶剂，通常是各种有机溶剂或缓冲液。
• 泵（Pump）：用于加压推动流动相通过色谱柱。在高效液相色谱（HPLC）中，泵通常可以提供高达几千 psi 的压力，确保流动相能够顺利通过细小颗粒填充的色谱柱。
• 脱气装置：用于去除流动相中的溶解气体，避免气泡对分离和检测过程的干扰。

2. 进样系统

进样系统的作用是将样品精确且快速地引入流动相中，通常需要定量加入一定体积的样品。

• 手动或自动进样器：可以通过手动进样阀或自动进样器将样品注入流动相中。自动进样器适合高通量的分析任务。
• 进样环（Loop）：精确控制注入系统的样品体积。

3. 色谱柱（Column）

** 色谱柱是色谱仪的核心部分 **，通常由不锈钢管制成，内部填充固定相（如硅胶颗粒或其他填料），样品在色谱柱内的流动相和固定相之间进行反复的相互作用，从而实现分离。

• 固定相（Stationary Phase）：通常是高效填料，决定了分离的机制（如反相色谱、正相色谱等）。
• 色谱柱温控系统：部分色谱仪配备加热器，以控制色谱柱的温度，从而影响样品分离效果。

4. 检测器（Detector）

检测器用于监测从色谱柱中流出的组分，并生成相应的信号以供分析。常见的检测器有以下几种：

• 紫外-可见光检测器（UV-Vis Detector）：监测样品组分的紫外吸收情况，是 HPLC 中最常用的检测器。
• 荧光检测器（Fluorescence Detector）：用于检测样品组分的荧光特性，灵敏度高。
• 质谱检测器（Mass Spectrometry, MS）：能够提供样品分子的质量信息，结合 HPLC 可进行定性定量分析。
• 电导检测器（Conductivity Detector）：用于检测离子化合物的电导变化，常用于离子色谱。

5. 数据处理系统

数据处理系统用于记录和分析检测器产生的信号，将其转化为色谱图或数值数据，并进行峰面积或高度的定量分析。现代色谱仪通常配备计算机系统，能够自动进行数据处理、峰识别、定量分析等。

• 色谱工作站软件：用于控制整个色谱系统，处理、分析和保存色谱数据。

6. 废液处理系统

在样品通过检测器后，流动相及其携带的样品组分会排放到废液瓶中。废液处理系统确保流动相和样品废液的安全处理。

总结

色谱仪的构造可分为流动相供应系统、进样系统、色谱柱、检测器、数据处理系统和废液处理系统等六个主要部分。各部分协同工作，实现对样品中各个组分的高效分离和精确检测。这些部分在不同类型的色谱仪中可能略有不同，但基本原理和功能相似。

制备色谱（层析纯化）的原理和操作

几种常用的层析过滤方法

** 1.凝胶过滤层析 ** 大分子先出峰、小分子后出峰

** 2.离子交换层析 **

** 3.疏水层析 **
疏水基团在高盐环境下吸附、在低盐环境下解吸

** 4.亲和层析 **

2.气相色谱

灵敏度高

分析对象

气相色谱仪构造

色谱株需要维持代谢物在气化状态下，因此色谱柱一般在高温的柱温箱中