AbMole| 人源化单抗动物实验黄金指南(下)

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全人源化抗体是指将人类抗体基因通过转基因或转染色体技术，将人类编码抗体的基因全部转移至基因工程改造的抗体基因缺失动物中，使动物表达人类抗体，达到抗体全人源化的目的。人源化抗体主要指鼠源单克隆抗体以基因克隆及DNA重组技术改造，重新表达的抗体，其大部分氨基酸序列为人源序列取代，基本保留亲本鼠单克隆抗体的亲和力和特异性，又降低了其异源性。

单抗命名规则：最末尾三个字母是mab，表示该产品为单克隆抗体；再往前2个字母，如果是xi，则该产品为嵌合型单抗；如果是zu，则该产品为人源化单抗；如果只有一个u，则表示该产品为全人源化单抗。

了解完单抗的一些小知识后，欢迎大家来继续和小奥AbMole一起深入了解其他几个热门单抗在动物实验中的运用。

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Cetuximab（M6103）

Cetuximab（西妥昔单抗）属于嵌合型IgG1单克隆抗体，分子靶点为表皮生长因子受体（EGFR）。

首先，分离收集人CD34+造血干细胞，然后使用伽马射线辐射新生NSG幼鼠。将人CD34+ CD133+造血干细胞通过心内注射注入经过辐射的小鼠体内。构建人源化小鼠成功后，通过超声引导将携带荧光素酶的MDA-MB-231乳腺癌细胞移植到正常成年NSG小鼠和人源化小鼠的心腔内，构建小鼠肿瘤模型。对健康或荷瘤小鼠进行腹膜内单一或联合注射Cyclophosphamide（100 mg / kg）和/或Cetuximab（10 mg / kg），之后数日收获组织。

结果表明，Cetuximab与Cyclophosphamide联用能很好地抑制乳腺癌细胞生长。

参考文献：Cyclophosphamide Enhances Cancer Antibody Immunotherapy in the Resistant Bone Marrow Niche by Modulating Macrophage FcgR Expression

Pembrolizumab（M6102）

Pembrolizumab （派姆单抗）是一种有效的、高选择性的、人源IgG4-kappa单克隆抗体，同时也是抑制剂，靶向PD-1，具有潜在的免疫检查点抑制活性和抗肿瘤活性。

将脐带血CD34 +细胞移植入BRGS（BALB/c Rag2 -/- IL-2Rγc -/- NOD.sirpa ）小鼠，19周后，将从裸鼠获得的CU-ACC2-M2B PDX组织植入人源化hu-CB-BRGS小鼠，以产生CU ACC2-hu-CB-BRGS小鼠。当肿瘤达到一定体积后，以30 mg/kg的剂量每周两次将Pembrolizumab注入小鼠腹膜。

结果表明，Pembrolizumab较好地抑制CU-ACC2-hu-CB-BRGS小鼠的肿瘤生长。

参考文献：Development of an Adrenocortical Cancer Humanized Mouse Model to Characterize Anti-PD1 Effects on Tumor Microenvironment

Ramucirumab（M1629）

Ramucirumab（雷莫芦单抗）是一种VEGFR2拮抗剂，与VEGFR2的胞外段有很高的亲和力，能阻断VEGFR2与其天然配体（VEGF-A, VEGF-C and VEGF-D）的结合（对鼠类VEGFR-2缺乏活性）。

将人脂肪来源的干细胞（ADSCs）和内皮集落形成细胞（ECFCs）按1：4的比例混合于Matrigel中后，皮下注射到雌性无胸腺Nude小鼠的腹侧。移植后三天内开始血管生成，第四天出现血液灌注。

分别在第0天或第4天使用IgG或Ramucirumab（10 mg / kg）进行腹膜内注射治疗。在处理后4天收集固定植入物，并使用对免疫细胞化学染色的切片进行分析（用CD31标记内皮细胞，TER-119抗体标记红细胞）。

结果表明，在血管形成过程中，越早使用Ramucirumab，就越能更大程度上地抑制血管生成。

参考文献：Development and characterization of a high-throughput in vitro cord formation model insensitive to VEGF inhibition

Tocilizumab（M6223）

Tocilizumab（托珠单抗）是人源化单抗，可与interleukin-6 receptor结合发挥抑制作用。

利用JIO小鼠模型，在异氟烷麻醉下，通过手术诱导6周龄C57BL / 6雄性小鼠股骨远端骨缺血性骨坏死。在手术后第3天，每只小鼠腹腔内注射100μl生理盐水或100μl Tocilizumab溶液至骨坏死或假手术组。小鼠至多接受六次，每周8 mg / kg 的Tocilizumab注射直至终点。

结果表明，在低氧条件下，进行Tocilizumab治疗可影响骨形成、吸收及相关分子的表达。

参考文献：IL6 receptor blockade preserves articular cartilage and increases bone volume following ischemic osteonecrosis in immature mice

Daratumumab（M1616）

Daratumumab（达雷木单抗）是一种直接靶向CD38的IgG1k单克隆抗体（适用于人源或免疫缺陷型小鼠）。

将混悬于生理盐水中的CA46-luc细胞经静脉注射到SCID小鼠体内以构建肿瘤模型。将小鼠随机分组，并每周一次腹膜内注射200μL含50μg（〜2 mg / kg）CD38特异性hcAbs WF211-hcAb，MU1067-hcAb，JK36-hcAb，同型对照l-15-hcAb或Daratumumab的生理盐水进行治疗。

结果表明，实验研究的各CD38特异性抗体及Daratumumab均可很好地抑制CA46-luc肿瘤的增长。

参考文献：Nanobody-based CD38-specific heavy chain antibodies induce killing of multiple myeloma and other hematological malignancies

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