荧光标记的基本原理:
蛋白荧光染料标记的原理主要基于荧光染料与蛋白质之间的相互作用。荧光染料通常具有特殊的化学结构,能够与蛋白质分子中的某些官能团(如氨基、羧基等)发生反应,从而与蛋白质结合。当荧光染料与蛋白质结合后,受到激发光的照射,染料分子会吸收光能并跃迁至激发态,随后释放出荧光信号。这种荧光信号可以被荧光显微镜、流式细胞仪等设备检测,从而实现对蛋白质的可视化标记和检测,常用的荧光有:荧光素FITC、荧光素RBITC、辣根酶HRP、碱性磷酸酶AP、胶体金标记Co-Au、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、APC、PE、Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 647等。
荧光蛋白标记的应用
1.蛋白质定位:
通过荧光蛋白标记,可以直观地观察蛋白质在细胞中的位置和分布,理解其功能和细胞内动态。
2.细胞跟踪:
在细胞培养或体内模型中,可以利用荧光蛋白标记跟踪特定细胞的迁移和分布,例如在癌症研究中跟踪肿瘤细胞的转移。
3.基因表达研究:
荧光蛋白作为报告基因,能够帮助研究人员在活细胞中实时监测特定基因的表达。
4.蛋白质相互作用研究:
通过共局化分析或荧光共振能量转移(FRET)技术,可以研究蛋白质间的相互作用。
常用的荧光标记多肽、蛋白、抗体、小分子药物的荧光有:
异硫氰酸荧光素 FITC 3326-32-7
异硫氰酸荧光素-活性酯 FITC-NHS 117548-22-8
异硫氰酸荧光素-活性酯 5(6)-FAM-SE 117548-22-8
氨乙基(硫脲基荧光素) 5-FITC-C2-NH2 75453-82-6
5-异硫氰酸荧光素乙二胺 5-FITC-C2-NH2 75453-82-6
吲哚菁绿ICG ICG 3599-32-4
Cy5
Cy2
Cy7
吲哚菁绿ICG-活性酯 ICG-NHS 1622335-40-3
吲哚菁绿ICG-氨基 ICG-NH2 1686147-55-6
吲哚菁绿ICG-马来酰亚胺 ICG-MAL 2143933-81-5
吲哚菁绿ICG-羧基 ICG-COOH 181934-09-8
吲哚菁绿ICG-炔基 ICG-Alkyne 1622335-41-4