细胞转染实验中的注意事项有哪些？

细胞转染实验是分子生物学和遗传学研究中常用的实验方法之一，用于将外源基因导入真核细胞，以便进行基因表达和功能研究。然而在进行细胞转染实验时，需要注意一些事项以确保实验的准确性和可靠性。接下来就让我们一起来了解一下在细胞转染实验中的注意事项有哪些吧！
一、细胞准备

a.细胞状态。使用形态正常，活率在90%以上的健康细胞，确保细胞没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的细胞，需要在转染前传代3-4次。

b.细胞密度。建议在转染前24 h接种细胞，贴壁细胞转染时的细胞密度一般在70%-90%。

c.细胞培养基。细胞培养基中可以添加血清，血清有助于维持转染后的细胞状态，但最好不要在培养基中添加抗生素，对于一些敏感细胞，抗生素的存在会引起细胞毒性。

二、转染试剂的稀释

a.稀释液的选择。建议使用减血清培养基稀释，血清的存在会影响转染复合物的形成。

b.转染试剂的量。需要进行优化，可以固定核酸的量，设置转染试剂的梯度，建议转染试剂和DNA的比例在1:1~1:5。

c.稀释时动作要轻柔，避免剧烈吹打和涡旋。

三、核酸的稀释

a.核酸的质量。对于质粒DNA，需要使用高纯度、无菌、无内毒素的高质量DNA（建议用无内毒素质粒DNA提取试剂盒抽提质粒），对于siRNA，同样需要保证高纯度。

b.核酸的量。可以建立梯度摸索最佳投入量。

c.稀释时动作要轻柔，避免剧烈吹打和涡旋。

四、转染复合物的制备

a.加样顺序。Lipomaster系列转染试剂的加样顺序为稀释后的核酸加入到稀释后的转染试剂中。

b.转染复合物的孵育时间按照说明书设置。

五、转染复合物滴加入细胞中

a.转染复合物滴加时需要逐滴加入，并及时充分混匀，避免培养基局部转染试剂浓度过高。

b.转染后6-8h可更换新鲜培养基。对于一些敏感细胞，换液可以降低细胞毒性。

六、观察分析转染结果

a.选择合适的分析方法。若转染的质粒表达荧光蛋白可以使用荧光显微镜观察或流式细胞仪分析转染效率。此外，可以运用qPCR检测mRNA或WB检测目的蛋白表达。

b.合适的检测时间。不同的蛋白达到最高表达水平的时间有所差异，需要根据实际情况调整检测时间。

把控住这些转染流程中的小细节，你也可以轻松拿捏细胞转染实验哦！如果你有更多关于细胞转染实验中的注意事项的问题，请给百奥创新留言哦~