PEI转染试剂说明书（悬浮细胞转染）

目前使用最广泛的阳离子聚合物转染试剂是PEI（聚乙烯亚胺），因其毒性低、成本低、免疫原性低，可将外源基因转染到悬浮细胞或贴壁细胞中。同时，它也是一种适用于瞬时转染人HEK-293T细胞的试剂，尤其适用于大规模生产重组病毒载体。自1995年PEI首次被用于DNA转染以来，就因其安全性和稳定性而被广泛应用于科学研究和基因疗法中。随着PEI技术的不断革新与发展，现在PEI被广泛应用于生命科学研究、非病毒载体体内转染研究、病毒和蛋白生产专用研究中。那么，你了解过Polysciences PEI转染试剂说明书（23966-1）吗？以6孔板转染293F悬浮细胞为例。小规模转染时，离心对数期生长的细胞用新鲜的培养基重悬浮使细胞密度达到1×106cells/mL 如需大规模转染，细胞密度要到达2-3×106cellsml/mL。

（一）转染前准备

1)HEK293F细胞传代接种于20mL悬浮细胞生长培养基中(36.5℃，120rpm，5%CO2)的条件下培养。当细胞密度到 1×106cells/mL，然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2-4小时后可以进行转染。

（二）转染过程

2)用1ml OptiPRO™SFM(无血清培养基)稀释适量的DNA，使DNA终浓度为1ug/ml（DNA/总培养体积），混匀并静置 5min。

3)用1ml OptiPRO™SFM(无血清培养基)稀释适当比例的PEI25000，混匀并静置10min。（PEI： DNA参考比例范围，可参考上述贴壁细胞PEI和DNA优化方案优化）。

4)将稀释的PEI25000转染试剂加入到稀释的质粒中轻轻混匀，室温孵育30分钟。

5)将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床（36.5℃，5%CO2，120rpm）。

6)基因表达可在24-72小时后检测，具体时间取决于细胞系和转基因。

PolysciencesPEI转染试剂说明书（23966-1）小贴士：

1)在悬浮培养中，单个细胞的转染效率要高于聚集在一起的细胞，需要优化适合单细胞的

生长条件。

2)方形瓶应经过两个连续的干燥循环高压灭菌（每个45 分钟，干燥 5 钟）

3)盖子应尽可能松，不得脱落。应该让它们冷却拧紧盖子前，将其完全放入层流罩中。如果瓶子向内塌陷，细胞将无法正常生长。

4)如果要获得更多的蛋白产量，有参考文献表明转染后24小时，可以适当稀释细胞，稀释比例参考范围（1:2—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。

5)可以把DNA和PEI转染试剂直接加入到细胞悬液中进行转染，但必须经过上述特定流程的DNA和转染试剂的比例和用量的相应优化。

6)请根据自己实验用的细胞类型检索文献调整最佳细胞接种密度和适合的培养基及优化最佳的转染条件。