易基因 - 血液生物标志物在胰腺癌鉴定诊断和早期发现中的应用

易点评

胰腺癌早期通常没有症状，当症状出时，提示癌细胞已经发生转移，此时进行临床治疗已经失去了最佳治疗时期。因此胰腺癌的早期筛查十分重要，而液体活检是一种快速、简便的癌症血液检测方法，主要包括血浆游离循环肿瘤DNA、循环肿瘤细胞、外泌体检测等。本文则从不同的标记物类型出发，综述了血液中生物标记物的发现在胰腺癌鉴别诊断和早期检测中的研究进展。此外，作者还讨论了这些研究进展的获得过程。分子生物标记的发现有利于提高诊断效率，还可能为新的治疗方案寻找到可能的靶点。在具备适当的筛查程序后，甚至可以精确定位出可能具有发展成PDAC的分子易感性的健康个体。

研究背景

2018年，全球报告的胰腺癌（PDAC）新病例为458,918例，死亡人数为432,242人。吸烟、糖尿病、慢性胰腺炎以及癌症家族史是肿瘤发生的主要因素。胰腺癌的表现是非特异性的，主要包括背痛、体重减轻、黄疸、恶心和糖尿病发作等。对其的诊断通常依赖于MRI和多层螺旋CT等影像学检查，以及胰腺组织穿刺等的病理检查。

手术仍然是胰腺癌最好的治疗方案，尤其对于早期胰腺癌患者来说，能够显著提高其5年生存率。然而，大多数PDAC患者确诊时就已经是晚期，只有10-20%的患者有资格接受手术。因此，PDAC的早期诊断尤为关键，而理想的分子生物标志物应满足以下几个特征：具备疾病潜在相关机制的生物学可行性；可以通过非侵入性和常规手段对其进行分离；表现出诊断高度敏感性，特别是在早期检测方面；具备能够区分不同病理条件的高特异性。生物标记物可以包括核酸(例如，microRNA)及其修饰(例如，DNA甲基化)、蛋白质或肽及其异构体和变体，以及细胞(例如，循环中的肿瘤细胞)或细胞外小泡等。

生物标记物的样本来源的应该具有易获取、体量多、可以获取特异性信息并表现出相关的变化等特点。因此，血液则成为了人们寻找生物标记物的主要样本来源。逐渐地，对生物标记物的研究慢慢转变成了对血液分子的研究，人们一般称其为液体活检(图1)。

图1

检测PDAC的血液生物标志物

蛋白质检测

几十年来，ELISA一直是检测蛋白质生物标志物的金标准。但大多数针对PDAC的ELISA研究仅着眼于一个或几个分子，导致可分析的标志物数量有限，而另一种解决在数量上这一限制的方法是质谱分析，它通常与其他分离技术相结合应用于人类血浆蛋白质组的研究。同时，抗体微阵列和多重免疫分析作为能够同时观察许多蛋白质的新兴方法在过去十年中也得到了广泛应用。这种检测手段的灵敏度很高，但缺点是会有分析物的偏好性。

单个蛋白质生物标志物

多年来科学家们已经对单个蛋白质进行了大量的ELISA分析。这些标记物的灵敏度/特异度阈值在文章中进行了详细列举。它们拥有作为特定生物标志物的潜在用途之外，一部分由于其独特的特征还会具备其他功能。

RNA水平的检测

近年来，microRNA作为生物标志物逐渐被人们发现，与mRNA相比，microRNA具有出良好的稳定性。与液体活检样本中的蛋白质类似，可以使用不同的过程进行microRNA分析。定量PCR(QPCR)通常针对单个标记，而DNA微阵列和下一代测序基本上可以关注所有的microRNA分子。具体有两种基本的分析模式：一种是处理血清或血浆样本，另一种是查看全血中的microRNA含量。

循环肿瘤DNA

肿瘤通过释放循环肿瘤DNA(ctDNA)在人体内留下其存在的证据。在血液中，ctDNA的半衰期很短。因此，ctDNA具有很强的代表性，可以及时的反映肿瘤发展过程中分子的动态变化。近年来，人们一直在研究ctDNA，以了解包括PDAC在内的一系列肿瘤的突变情况，识别与疾病相关的信号通路，并将其用于诊断。ctDNA被认为是一种通过观察影响几个分子通路的基因突变来进行PDAC肿瘤分类的新方法。例如，最近报道了PDAC的SST高甲基化，相关的变化也反映在了ctDNA中。然而，胰腺肿瘤的SST高甲基化不具有特异性，因此这种变化被认为是一类泛癌标记物，缺乏PDAC特异性。

循环肿瘤细胞

除了循环DNA外肿瘤也会脱落完整的细胞，甚至在肿瘤发生转移之前就可以在外周血液中检测到。对于循环肿瘤细胞(CTC)的阳性富集是通过选择上皮细胞粘附分子(EpCAM)或基于其细胞大小进行过滤来实现的。CTC分析的真正价值主要体现在：CTC比ctDNA更能代表每个肿瘤的特性，同时还能够反映其发展过程中发生的变异。因此，CTC分析可以提供风险分层信息，例如：可以提前预测肝转移；与癌症复发和较短的生存期有关。但也有研究发现PDAC患者的CTC检测与不良预后无关。

代谢产物

正常细胞向癌细胞转化的过程会伴随着代谢途径的重新编程。同时，癌细胞的生长在通常发生在缺氧的环境中，造成血管生长不良从而失去营养供给。而在PDAC中，存在一层十分致密的纤维间质，肿瘤的存在会大大提高血液中循环代谢物的丰度。核磁共振(NMR)和质谱等技术可以广泛寻找代谢生物标志物。一些研究已经表明，某些代谢物在区分PDAC和健康人方面有着很高的准确率（具体的代谢物和鉴定方法在文章中有详细阐述）。

鉴别PDAC和慢性胰腺炎的血液生物标志物

在临床上，区分不同的胰腺疾病是一个关键问题，它决定了后续治疗的整体方向。尤其对于PDAC的患者而言，由于治疗时间窗口很小，因此把握治疗先机十分重要。与健康的胰腺相比，PDAC和慢性胰腺炎（CP）有许多共同的分子变化。因此，临床上对于胰腺癌和CP区分的灵敏度和特异度通常只有65%左右。就目前而言，需要进行侵入性组织取样才能获得更具决定性的诊断结果。因此，为了实现更简单和低风险的诊断，可靠的非侵入性生物标志物的发现是十分必要的。表1列举出了现阶段已经发现的一些蛋白质以及其他类型的生物标志物。

表1

结论

经过几十年的临床研究，目前还没有建立起可靠的诊断试验来证明早期诊断胰腺癌的临床实用性。这是由于缺乏疾病的特定体征和症状，缺乏可靠的生物标志物，以及胰腺腹膜后位置导致的成像技术分辨率有限。然后，由于肿瘤细胞可能需要十多年的时间才能进化，可能还需要五年的时间才能获得转移能力。因此，识别更好的疾病标志物对癌症进行早期的分子检测是有可能实现的。

公司介绍

深圳市易基因科技有限公司（E-GENE）是位于深圳市坪山区的国家高新技术企业。公司主营业务包括组学技术和大数据分析及精准医学检测两大板块，涵盖生命科学研究、高通量测序和体外诊断等领域。

基于公司在生命组学与大数据信息技术领域的深厚技术与资源积累，易基因建设了易基因云、肿瘤精准医学数据库系统及AI检索与标志物挖掘算法系统，在癌症早筛早诊、伴随诊断与辅助诊断、用药指导等方向进行系列产品开发，目前已经研发成功了一系列基于DNA甲基化的针对多个癌种的早期预警和预后监测标志物产品。同时，公司还自主开发了血浆游离DNA甲基化高通量测序文库试剂盒、靶向血浆游离 DNA甲基化测序等技术，结合易基因的信息系统与研发平台，提供国际领先的科研和技术产品服务。还能够为生物医药公司、高等院校、医院和科研院所等提供体外诊断标志物筛选、开发与验证，药物靶点发现等研发外包服务。公司与国内外多家知名企业和单位建立了战略合作关系，共同致力于为生物医药领域提供性能卓越的产品和优质的服务。如果您有任何医疗、科研上的问题和需求请联系我们！

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