shell搭建的RNA-seq原始数据处理流程

#!/bin/bash
st=5575800
en=5575805
index=/data/long/RNA-seq/refgenome/bos_tran/Bos_tran
gtf=/data/long/RNA-seq/refgenome/Bos_taurus.UMD3.1.94.gtf
#download SRA data
mkdir 1_SRA
cd 1_SRA
for ((i=$st;i<=$en;i++))
do
wget https://sra-download.ncbi.nlm.nih.gov/srapub/SRR$i
done
cd ..
#convert into fastq
mkdir 2_fastq
cd 2_fastq
export PATH=$PATH:/data/long/biosoft/sratoolkit.2.8.2-1-ubuntu64/bin
for ((i=$st;i<=$en;i++))
do
fastq-dump --split-3 ../1_SRA/SRR$i -O . 
done
cd ..
#fastqc quility control
mkdir 3_fastqc
cd 3_fastqc
for ((i=$st;i<=$en;i++))
do
srr1="../2_fastq/SRR"$i"_1.fastq"
srr2="../2_fastq/SRR"$i"_2.fastq"
fastqc -o . -t 5 -f fastq $srr1
fastqc -o . -t 5 -f fastq $srr2
done
cd ..
#hisat2 
mkdir 4_hisat
cd 4_hisat
#blast
for ((i=$st;i<=$en;i++))
do
hisat2 -p 16 -x $index --sra-acc ../1_SRA/SRR$i -S SRR$i.sam
done
cd ..
#samtools
mkdir 5_samtools
cd 5_samtools
export PATH=$PATH:/data/long/biosoft/samtools-1.6
for ((i=$st;i<=$en;i++))
do
samtools view -bS ../4_hisat/SRR$i.sam > SRR$i.bam
samtools sort SRR$i.bam -o SRR$i.sort.bam
done
cd ..
#stringtie
mkdir 6_stringtie
cd 6_stringtie
export PATH=$PATH:/data/long/biosoft/stringtie-1.3.5.Linux_x86_64
echo "" > mergelist.txt
for ((i=$st;i<=$en;i++))
do
stringtie ../5_samtools/SRR$i.sort.bam -p 4 -G $gtf -o SRR$i.gtf
echo ./SRR$i.gtf >> mergelist.txt
done
stringtie --merge -p 4 -G $gtf -o stringtie_merged.gtf mergelist.txt
for ((i=$st;i<=$en;i++))
do
stringtie -e -B -p 4 -G stringtie_merged.gtf -o ballgown/SRR$i/SRR$i.gtf ../5_samtools/SRR$i.sort.bam
done

RNA-seq(转录组测序)原始数据的分析通常涉及多个步骤,包括质量控制、剪接拼接、基因表达估计等,需要用到R语言的生物信息学库如DESeq2、edgeR、Bioconductor等。由于完整的R代码会相当复杂且长度过长,这里提供一个基本的流程概述,并给出关键部分示例: 首先,安装必要的包(假设已经通过BiocManager安装了它们): ```R if (!requireNamespace("BiocManager", quietly = TRUE)) install.packages("BiocManager") BiocManager::install(c("DESeq2", "Tximport", "edgeR")) ``` 然后加载并预处理数据(这只是一个简化示例): ```R library(DESeq2) library(Tximport) # 加载fastq文件,假设是paired-end数据 fastqs <- c("file1_R1.fastq.gz", "file1_R2.fastq.gz", "file2_R1.fastq.gz", "file2_R2.fastq.gz") # 对比RNA-seq计数数据 counts <- tximport(fastqs, type = "salmon", txOut = TRUE) dds <- DESeqDataSetFromTximport(counts, colData = yourSampleInfoDataFrame, design = ~ condition) ``` 接下来进行质量控制和过滤低表达基因: ```R # 质量检查 plotCounts(dds) # 过滤低表达基因 keep <- rowSums(counts(dds) >= 10) >= 10 # 可能需要根据实际情况调整阈值 dds <- dds[keep, ] ``` 最后进行差异表达分析: ```R # 差异表达分析 dds <- DESeq(dds) res <- results(dds) ``` 对于详细的分析结果,你可以生成 volcano 或 MA 图形: ```R library(ggplot2) ggplot(res, aes(x = log2FoldChange, y = -log10(pvalue), color = padj < 0.05)) + geom_point(size = 3) + theme_minimal() + labs(x = "Log2 Fold Change", y = "-log10 adjusted p-value", title = "Volcano Plot") ``` 这只是整个流程的一个概览,实际操作中还需要根据具体研究设计、实验条件等因素进行调整。如果你需要更具体的代码段或有特定问题,可以告诉我。
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