家蚕氨基酸、微量元素及总黄酮含量测定分析

家蚕氨基酸、微量元素及总黄酮含量测定分析

　　电化学微量元素分析仪介绍到，家蚕是一种药食两用佳品，我国民间早有以家蚕为原料进行保健的用法。《神农本草经》、《本草纲目》等记载了家蚕的药用价值.其功用主治为小儿疳积、消瘦、消渴等。近年韩国学者Kang Sun Ryu首次报道了5龄家蚕幼虫含有a-2麦芽糖苷酶抑制剂。家蚕含有蛋白质，糖类、脂质、维生素、无机盐、水分等营养成分及黄酮类、l-脱氧野尻霉素等药用成分。与桑叶相比.氨基酸含量是桑叶的2～4倍。本实验对5龄3天家蚕幼虫冻干粉(全蚕粉)中氨基酸、蛋白、总脂肪酸.微量元素及总黄酮古量进行测定分析+为家蚕的保健食品及药物开发提供实验数据。

　　l材料与方法

　　1.1材料：全蚕粉取专用蚕品种5龄第3天幼虫(福建省桑蚕研究所.冻干.批号：200601。200701.200702)。Waters高效液相色潜仪(1 525泵，2487萦外检测器，挂温箱，色谱工作站，美国);BP211D电子天平(德国);KJEI。TFc2300凯氏自动定氮仪(瑞典);AA一670原子吸收光谱仪(口奉);uV250 2P(’可见紫外分光光度计(日本)。17种氨基酸标准品(2.5 mmol/L各种水解氨基酸);Ac—cQ Fluor试剂盒(Waters公司)。芦丁(中国药品生物制品检定所)。乙腈，色谱纯。其他试剂均为分析纯。

　　1.2统计学分析z采用PEMS 3 l软件包(第3版)分析。

　　2方法与结果

　　2 1氨基酸测定：

　　2 I.1色谱条件：色谱柱为AccQ.Tag柱(150 mm×3.9mm.4 m)。流动相.A：pH 4 g5醋酸盐-磷酸盐缓冲液B：乙腈水(3：2)。流速1 0 mI/min.检测波长248 nm.柱温37℃。按表1条件进行洗脱。

　　2 2蛋白质测定：精密称取全蚕粉O 15 g.置凯氏烧瓶中，加浓硫酸12 m1.同时做空白对照。消化炉中加温消化至溶液透明后.继续加热30 min。消化完毕.自然冷却却至室温。在自动凯氏定氮仪进行蒸馏、滴定、计算.以等量浓硫酸和消化片做空白实验。计算的3批全蚕粉蛋白质含量为60.16Y 85%.60.56%(n-3)

　　2 3脂肪酸测定：精密称取全蚕粉10 g，置索氏提取器.乙醚200 ml回流提取6 h.滤液浓缩至40 mI.20%碳酸钠溶液提3次(30，z0、20 m1).合并碳酸钠液.盐酸醇化至pH I～2.再以己醚1∞ml提取。蒸于乙醚得淡黄色的油状物即为总脂肪酸.称重。结果3批全蚕粉脂肪酸含量分别为

　　2.11%.2.52%.2.23%(n=3)。

　　2 4微量元素测定：

　　2.4.1 工作曲线：精密吸取含Zn.cu各25ug/m1.Fe 50ug/ml，Mn 75 ug/ml.Mg 1 2.5 g/mI，Ca 125 g/ml各标准液O 1、0.2、0.4.0.6.0 8、1.0 ml置25 ml容最瓶.加水稀释至刻度。配制含K 80、1 60、240、.320、400，64C}ug/ml的标准溶液。原子吸收光谱法测定各元素，火焰发射光谱法测定钾元素，测定波长分别为21 3 9、324 7、248 3、279.5、285.2、422.7、766.5 nm。仪器自动生成二次拟台曲线。

　　2 4.2样品测定：精密称取全蚕粉O.5 g.置100 mI打英烧杯中.加入硝酸高氯酸(10 ： 1)lO ml，密封静置24h，电热板加热消化至溶液呈无色透明，近千为止。室温冷却.移至25 ml容量瓶.加亚沸蒸馏水稀释至刻线。同时作试剂空白。元索含量=(检测浓度×稀释倍数-空白浓度)×定容体积/样品重量.结果见表3。

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