光学共焦显微技术part 1

最新推荐文章于 2023-07-16 21:55:52 发布

felix_zhangshou

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分类专栏：光学共焦显微技术part1 文章标签：光学显微技术共焦显微技术

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光学共焦显微技术part 1

普通光学显微镜的主要缺点是分辨率受到了衍射极限的限制，分辨率与照明波长在同一个数量级，另一个限制就是他的有限焦深，因此这使得普通光学显微技术对厚样品不可能三维成像。
共焦显微镜最初提出来是为了消除普通显微镜在探测样品时产生的多种散射光，利用点光源照明，点探测。共焦显微成像技术具有很强的纵向深度的分辨能力，而且由于探测器前有针孔掩模，大大减小了不想要的闪烁和散射光所形成的噪声。
对荧光样品标记的生物样品，可以利用测量样品的辐射来记录共焦像，被称为荧光显微术，若入射光足够强，可以在样品上激发双光子荧光，提出了共焦双光子荧光显微术。在共焦显微镜中引入光纤和光纤光学元件形成了更加紧凑的光纤光学共焦扫描显微镜（FOCSM），系统受到激光器振动和电子器件设备影响较小，最重要的特性是对明场成像完全相干。超短脉冲激光器的引入将时间自由度引入3-D成像中。为改善轴向分辨率提出的4Pi共焦显微术，由两束光在相对的方向上照明物体，从两个相对的侧面收集信号光，使物镜的有效数值孔径增加，明显改善了共焦成像的轴向分辨率。引入3-D传递函数的概念来描述3-D共焦成像。
虽然所有的共焦显微镜均在探测器前面使用小孔掩模技术，但是他们的成像性能完全不同，成像中的相干性与样品、探测器尺度以及光学元件有关，可分为相干成像、非相干成像和部分相干成像。若使用点探测器和点源照明，则为完全相干成像，若使用有限尺度探测器（符合实际应用），则为部分相干成像，若样品被荧光材料标记，照明光的相干性被样品破坏，则为非相干成像。但光纤光学共焦扫描显微镜（FOCSM）却是完全相干的，在此忽略光纤孔径尺度，因为光纤对光振幅和相位的传输都是一个波导。但FOCSM应用于荧光成像又是非相干的。超短脉冲照明的共焦显微成像技术，探测器的时间响应影响成像相干度，若探测器的时间响应长即使是点探测器也会呈现出部分相干的性质，当时间响应为脉冲式时才有可能相干成像，应用于荧光样品时，为非相干成像。