Western印迹法要点难点，建议收藏！

1、概述：

 

Western印迹法（英语：Western blot），是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，也是HIV检测的方法之一。

利用特定抗体能够专一结合其抗原蛋白质的原理来对样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息，来分析检测特定蛋白质的生物学检测技术。

发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克（George Stark）。[1]在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为“Western印迹法”。

 

 

2、原理：

Western Blot与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE（根据分子大小）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。51xxziyuan

 

3、实验步骤：

实验大致分为铸胶、跑胶、转渍、接一级抗体、接二级抗体以及压片几个部分。

 

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