“众所周知,PCR是生化实验室基本的实验方法。”实验结果却总是不尽如意,有可能是PCR塑料耗材微量的污染,或者是抑制剂的引入造成的实验干扰。还有一个很重要的原因:耗材选择不当也会对实验结果造成很大的影响。
影响PCR实验结果得原因有很多:通常有以下7种。
1、引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度;
2、 酶及其浓度 ;
3、dNTP的质量与浓度;
4、模板(靶基因)核酸;
5、Mg2+浓度;
6、温度与时间的设置;
7、循环次数;
8、设备、耗材等。
在众多影响因素中,耗材是一个非常重要、也极容易被忽视的因素之一。
PCR耗材类型众多:8连管、低容管、标准管、无裙边、半裙边,全裙边,升孔缘等一系列的PCR及qPCR板,选择起来非常困难,在这中间存在许多具有共性的问题,小析姐对这些问题进行了汇总。我们一起来看看大家在选用PCR耗材时都遇到了哪些问题,又该如何解决呢?
常见问题及解决办法
一、PCR耗材为什么一般都是PP材质的呢?
答:PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材质,因其为生物学惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有着良好的化学耐性,及温度耐受性(可121度高压灭菌,也可以承受热循环过程中的温度变化)。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触,因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。
二、不同体积的PCR 管/板,我该怎么选呢?