结果不对_PCR实验结果总不对？耗材是个坑！

最新推荐文章于 2022-01-07 11:12:20 发布

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文章标签：结果不对

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“众所周知，PCR是生化实验室基本的实验方法。”实验结果却总是不尽如意，有可能是PCR塑料耗材微量的污染，或者是抑制剂的引入造成的实验干扰。还有一个很重要的原因：耗材选择不当也会对实验结果造成很大的影响。

影响PCR实验结果得原因有很多：通常有以下7种。 1、引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度； 2、酶及其浓度； 3、dNTP的质量与浓度； 4、模板(靶基因)核酸； 5、Mg2+浓度； 6、温度与时间的设置； 7、循环次数； 8、设备、耗材等。 在众多影响因素中，耗材是一个非常重要、也极容易被忽视的因素之一。 PCR耗材类型众多：8连管、低容管、标准管、无裙边、半裙边，全裙边，升孔缘等一系列的PCR及qPCR板，选择起来非常困难，在这中间存在许多具有共性的问题，小析姐对这些问题进行了汇总。我们一起来看看大家在选用PCR耗材时都遇到了哪些问题，又该如何解决呢？

常见问题及解决办法

一、PCR耗材为什么一般都是PP材质的呢？ 答： PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材质，因其为生物学惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有着良好的化学耐性，及温度耐受性(可121度高压灭菌，也可以承受热循环过程中的温度变化)。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触，因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。 二、不同体积的PCR 管/板，我该怎么选呢？ 答： PCR管的体积大多数都可以满足PCR反应要求。但是在满足实验要求的基础上，优先推荐选用低容管哦。因为低容反应管/板有着较小的上方空间，可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时，需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降，溢出及交叉污染，而加样过少可能会造成样品蒸发损失。大家可依据具体的实验要求选用更合适的产品。 常见反应管规格及体积： 单管/联管：0.5mL，0.2mL， 0.15mL 96孔板：0.2mL， 0.15mL 384孔板：0.04mL 三、为何有的PCR管是平盖，有的是凸盖呢？ 答：当样品量较少时，都会优先选用单管或者连管。但是当反应体积需求较大时，单管可达到0.5mL呢。平盖和凸盖各有优点呢，可参考下面的信息。

四、不同颜色的PCR 管/板，我该怎么选呢？ 答：对于普通的PCR反应选用透明或者彩色的PCR管都是可以的，而彩色透明的PCR管更有助于进行样品分类管理哦。

但qPCR更推荐选用优质的白色PCR耗材。

由于qPCR需要实时定量检测荧光信号强度，更需要灵敏、精确的荧光信号传递。与传统的透明PCR产品相比，白色PCR产品可最大程度地反射荧光信号，减少孔间信号交叉污染，可优化实时荧光定量PCR的结果。

五、PCR板/管材质厚度不一，是不是厚点的稳定性更好呢？ 答：一般分为无裙边、半裙边、全裙边。

无裙边板：可适用于大多数的PCR仪或qPCR仪，但不适用于自动化、应用。移液过程中稳定性不高，需要配合板托使用。半裙边板：可适配标签或应用条码，及自动化应用，且有着较好的移液稳定性。全裙边板：非常适用于自动化实验应用，也可适配标签及应用条码。机械强度较好，可适用于凸出模块的PCR仪，且移液过程中稳定性高。六、96和384孔板切角和标识不同？答： A切角： PCR板的切角位置选择取决于适配仪器要求，便于定位。