免疫荧光（IF）常见问题分析

免疫荧光(Immunofuorescence, IF)的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来标记目的蛋白，主要包括直接法和间接法。直接法是目的蛋白和带有荧光基团的一抗结合，间接法是目的蛋白和一抗结合，然后一抗再与带有荧光基团的二抗结合，通过荧光显微镜可观测到荧光，进而观测到目的蛋白。

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样本处理

— 细胞爬片

1,在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min.

2.在4%多聚甲醛或其他固定液常温固定20min, PBS洗三次,每次3min(固定方法不唯一,具体可参考后续“细胞固定”部分)。

3.在0.2% Triton X-100室温通透5min, PBS洗三次,每次3min。

— 冰冻切片

1,冰冻切片室温平衡10-20min。

2.在4%多聚甲醛常温固定20min, PBS洗三次,每次3min

3.在0.2% Triton X-100室温通透5min, PBS洗三次,每次3min.

— 石蜡切片

1.脱蜡

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