什么是荧光原位杂交(FISH)？

01

—

 

什么是FISH

 

 

FISH：采用了已知序列的、特异性的单链核酸作为探针，标记了生物素或荧光素，在一定的温度和离子浓度下通过碱基互补配对法则，使得DNA-DNA原位杂交，采用荧光法显示，最终将DNA在细胞爬片、组织切片(石蜡切片or冰冻切片)的原始位置上标记出来的一种技术。

 

 

 

 

上一代的FISH还是采用的同位素进行标记，现在基本上都是荧光标记了。在此，要感谢J.G.Baunlan这位大神了。

 

有了FISH，我们可以不再仅仅依赖分子生物学的方法来检测DNA的表达了。FISH技术最大的优点是可以在间期细胞核上直接观察到DNA扩增，并且荧光信号的强度直接与DNA扩增水平直接相关。这些都大大促进了分子细胞遗传领域的科学研究，同时也是临床上诊断肿瘤的利器。

 

 

02

—

 

FISH的实验要点

 

 

网上有很多关于FISH的实验步骤教程，但每个探针盒子的操作可能存在差异。懂了原理，才能以不变应万变。因此，本部分主要是详细讨论实验要点。

 

FISH的大致步骤分为探针变性、标本变性、杂交、洗脱、杂交信号放大(适用于适用生物素标记的探针)、复染、封片、荧光显微镜观察FISH结果。

 

要点：

 

（1）良好的前期标本制备十分重要，这点对于采用秋水仙素刺激得到中期染色体分裂象尤为重要。刺激时间过短或过长都会影响实验观察，因此需要耐心摸索作用时间。

 

（2）蛋白酶K的作用浓度。浓度高了极易影响细胞核形态，造成模糊不清，浓度低了则探针不易进入细胞核，杂交率大大降低。石蜡切片一般要达到10-30min，不要超过半小时，一般来说，20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min足矣。

 

文章剩余内容<<<<