UPLC:超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography)
色谱理论认为提高色谱柱的效能(efficiency)就能增加仪器的解析度(resolution),而运用粒径低于2μm的小颗粒无疑是增加效能的好方法。但减小固定相的粒度以增加色谱柱效能一直的色谱仪器科学的瓶颈,因为小颗粒不仅要求系统能承受高于目前极限压力(比如9000psi),需要更小的系统体积(死体积),并且需要能适应可能只有几秒峰宽的高速检测器。
UHPLC:超高效液相色谱 (Ultra-High Performance Liquid Chromatography)
特点是工作压力超过6000 psi或工作温度超过环境温度的应用。由于 UHPLC 应用中使用的硬件通常可以承受 9000 psi或更高的系统压力,因此色谱工作人员可以使用由更高级固相(其颗粒远远小于传统的5 μm直径硅胶)填充的色谱柱。采用颗粒更小的固相不仅可以实现更高的分辨率,同时还能缩短整体分析时间。
HPLC:高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography)
又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
以下几幅图更直观的告诉我们区别何在:
UPLC和HPLC的区别
与传统的高效液相色谱(HPLC)相比,UPLC具有高分离度(ultra resolution)、高速度(ultra speed)、高灵敏度(sensitivity)等优势。在全面提升HPLC的速度、灵敏度和分离度诸品质的同时,保留其原有的实用性及原理。
其最显著的优势是可以缩短分析时间,提高工作效率。
使用UPLC确实能明显缩短分析时间,提高效率(如某有关物质分析方法,使用HPLC运行一针是75分钟,UPLC完全可以在10分钟内搞定),分析效率提高将近7.5倍。
当然了,分析效率提高这么多,其配套设备肯定也不是闹着玩的。UPLC需要小颗粒杂化填料(1.7um)的色谱柱、更高耐压(达15000Psi)、低系统体积的输液单元。
学会正确维护UPLC,避免被领导骂。
溶液的制备很关键
在色谱系统中,溶液是一个更重要的部分,那么UPLC中溶液的制备应该是怎样的呢?
样品溶液的制备
样品的制备同样是过滤和离心两种方法。
过滤:根据样品溶液的极性,选择不同材质的0.22um滤膜过滤。
滤膜的选择,要进行分析方法确证,滤膜的相容性实验。
此处强调一下,必须是0.22um,千万不要用错。
离心:采用高速离心的方式(大于10000转/分钟)。
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