多重连接探针扩增(Multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)是MRC-Holland在2002年开发的一种分子技术。它是一种灵敏的技术,可以快速有效地定量核酸序列。它在世界各地的许多实验室进行,可用于检测基因的拷贝数变化(如缺失或复制),识别DNA的甲基化状态,检测单核苷酸多态性(SNPs)和点突变,量化mRNA。
因此,它被应用于许多研究和诊断领域,如细胞遗传学、癌症研究、人类遗传学等。
工作原理
MLPA基本步骤如下,具体见图解
1. 变性
2. 杂交
3. 连接
4. 扩增(通过PCR)
5. 片段分离和数据分析
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详细解释
1. 变性和杂交
变性涉及退火DNA链的分离,使双链DNA变成单链。杂交即将DNA样本与特定探针杂交。由于它是一种多路复用技术,可以同时使用多达60个探头分析每个样本,从而针对不同的位点。这些探针具有引物序列,在扩增过程中与PCR -引物结合。所有不同的探针都有相同的引物结合序列,此外,探针还具有与目标位点互补的杂交序列,使探针