sumo的简单应用_简要介绍SUMO蛋白酶的作用以及使用说明

SUMO蛋白酶是自E.coli表达经亲和纯化的重组蛋白酶，是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶。它能识别SUMO蛋白的三级结构，而不是氨基酸序列，因此可以高效而且特异性地将SUMO蛋白从重组融合蛋白上切割下来。

SUMO蛋白酶的作用：

SUMO蛋白酶以一种非常特异的方式切割蛋白，它特异性识别UBL蛋白的三级结构－SUMO，而不是氨基酸序列，故该蛋白酶可以切割重组融合蛋白的SUMO。切割的最佳温度为30℃，该酶作用温度和pH范围(pH7-9)都比较广泛。酶切后，可通过亲和纯化很容易地将SUMO去除。SUMO蛋白酶在较宽范围的反应环境体系中能保持较高的活性，如温度(4-30℃)，PH (5.5-9.5)等，SUMO蛋白酶带有多聚His标签，便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除该蛋白酶。

SUMO蛋白酶的使用方法说明：

1. 10×SUMO Protease Buffer : 500mM Tris-HCl, 10mM DTT, pH 8.0。

2. SUMO蛋白酶与需要酶切的目的蛋白比例：1：100。

3. 酶切体系：

融合蛋白        1000 μg

10×SUMO Protease Buffer       20μL

SUMO蛋白酶     2μL

ddH2O定容至 1000μL

4. 酶切条件：推荐4℃酶切过夜，用户可以根据自己研究的目的蛋白进行摸索，以下酶切分析图片可供参考。

5. 酶切后可取少量样本进行SDS-PAGE分析，若要去除酶切后体系中的SUMO蛋白酶，可用His标签纯化树脂亲和层析。

SUMO蛋白酶的注意事项：

为达到最好的酶切效果，请保证重组蛋白为部分或完全纯化的蛋白。对于大部分融合蛋白，SUMO蛋白酶最理想的反应液中NaCl的浓度为150 mM。然而，根据实际情况可在100 mM～300mM之间调节NaCl的浓度以达到最佳的效果。请务必考虑到酶中的盐的浓度(终浓度为12.5 mM)和底物中盐的浓度。在进行酶切反应时，请选用合适的10X SUMO Buffer +/- Salt。 咪唑的浓度应低于150 mM，若高于该浓度会影响SUMO蛋白酶的活性。