流式凋亡率计算_【分选】流式细胞仪进行细胞分选

2.串行细胞分选

2.1流式细胞仪进行细胞分选

成功的流式分选比仅用于分析对样本制备要求更高。需要在较短的时间内完成以确保分到高纯度的活细胞同时要具备功能性如增殖、分泌细胞因子等。要求高品质的单细胞悬液以确保良好的双联体鉴别，并在分选过程中因发生冲突而丢弃的尽量少。如何最好地实现这些要求呢？

2.1.1缓冲液的选择

处理哺乳动物细胞的最常用培养基/缓冲液都是在1个大气压下使用的(实验室工作台上或CO2培养箱内)，但在大多数流式细胞分选仪的分选仓内，压力通常会超过2-4个大气压(具体取决于选择喷嘴尺寸和分选条件)。实践摸索出的分选中表现良好的样品分选缓冲液或分选收集缓冲液：DPBS或HBSS(去除Ca2+和Mg2+)，均含10~25mM HEPES和蛋白质(通常为1~2％的热灭活血清或BSA)，以及最近的推荐使用BD FACS™ Pre‐Sort Buffer外加0.2~2％的蛋白质(浓度取决于应用)。不推荐RPMI或DMEM之类的碳酸氢盐介质缓冲液因为(i)与仪器上常使用的鞘液成分不同(碳酸氢盐与磷酸盐)， (ii)设计上需要5％的CO2的环境来维持生理pH，并且(iii)通常包含二价阳离子(Ca2+和Mg2+)和苯酚(高荧光背景)。若必须使用碳酸氢盐介质，则应不含酚无Ca2+或Mg2+，或在25 mM的HEPES和蛋白质基础上添加~1 mM EDTA来减少二价阳离子副作用(使细胞“发粘”)。据报道，HEPES缓冲的碳酸氢盐培养基对光敏感109，通常流式样本均需避光放置。

2.1.2贴