显微镜自动聚焦原理是什么_共聚焦显微镜

共聚焦显微镜也叫激光扫描共聚焦显微镜，普遍用于荧光成像和细胞分析，它成像清晰、放大倍数大、分辨率高，是生物医学领域中强有力的研究工具。

共聚焦显微镜原理

共聚焦显微镜是由显微镜光学系统、激光光源、扫描器及检测及处理系统4部分组成，采用相干性较好的激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置，并利用计算机对图象进行处理的一套观察、分析和输出系统。

如下图所示，激光扫描束通过光栅针孔形成点光源，经过分光镜反射至物镜，聚焦在在标本上并进行扫描。样品受到激发后，发出的荧光回到分光镜聚集到探测针孔，Z后经过光电倍增管转化为电信号传输到计算机上显示为清晰的焦平面图像。激发光通过光栅针孔聚焦在样品上，荧光通过物镜聚焦在针孔上，此过程中形成两次聚焦，故被称为共聚焦显微镜。

普通生物样品切片结构复杂并且有一定厚度，利用普通荧光显微镜进行观察时，样品发射的荧光相互叠加，图像分辨率大大降低。

共聚焦显微镜的共聚焦成像能有效抑制焦平面外的杂散光和非测量光进入探测器，实现单一焦层面成像，使分辨率大为提高。载物台沿横向均匀移动时，可形成清晰的单层图像，沿纵向移动，可实现样品不同深度的逐层扫描，经过三维重建得到样品的三维立体结构，即所谓的“光学CT”。使用荧光探针对样品进行标记后再运用共聚焦显微镜观测，不仅可观察固定的各种细胞和组织结构，还可对活细胞的形态、结构、离子等进行定性定量定时观察及测定。

共聚焦显微镜的发展历史

1665年，di