实验
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TJ's Lucky Dog
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双荧光素酶实验的操作流程
转化及质粒提取过程使用DH5α大肠杆菌感受态细胞进行转化,将公司送回的质粒干粉先于离心机顺式离心,然后加入适量的水进行溶解(因为质粒量很多也很好转染,这步加入多少的水对实验的结果都没有影响),然后再次顺式离心获得质粒溶液。购买的感受态细胞一般为100微升/支,取其中的三分之一作为质粒转化的量就足够了,即一管做三个转化。感受态细胞保存在-80℃的冰箱中,取出时必须置于冰箱进行融化。加入之前的质粒溶液3微升(不超过感受态细胞的十分之一),不允许吸打溶液,包括之前感受态细胞的分装也是。冰上孵育30-60 min原创 2021-10-21 00:00:00 · 2326 阅读 · 0 评论 -
如何在细胞间做细胞实验?
更换培养液我们使用的MEM培养中带有酚红指示剂来反应细胞培养中的pH情况,其中培养液的颜色为红色时表明培养的pH大于7.4,适合于绝大细胞的生长(当然这也包括HaCaT细胞),由于细胞培养过程中代谢废物的产生以及在CO2培养箱中CO2的溶解,培养液的pH会不断的下降,当指示剂中颜色变为橙色时,培养液的pH大约为7.2,细胞基本停止生长,当培养液的颜色变为黄色时,其pH则小于7.2,不利于细胞生长甚至容易发生细胞的死亡。培养液的颜色变化幅度不是恒定的,因为其受到培养瓶中细胞数目的影响,培养瓶中细胞密度低时个原创 2021-10-19 22:04:05 · 784 阅读 · 0 评论