影响 PCR 体系蒸发的三大因素

提及 PCR 实验，是否出现过这样的问题？

假阳性

非特异性扩增

数据重复性差

假阴性

拖尾

无扩增产物

样本降解

其实，造成这些结果的原因有很多，例如引物质量不佳、模板质量不好、退火温度不合适等，但还有一个不容忽视的问题——PCR 体系蒸发。

聚合酶链式反应（PCR）需要依赖 PCR 仪对各反应阶段的温度和加热时长进行控制，整个 PCR 反应通常需要经过 20～40 次加热、冷却的温度循环，这个过程带来的反应如试剂蒸发和损失，对许多 PCR 实验结果影响显著，在检测灵敏度高的 qPCR 实验中还影响透光性，从而导致结果不准确。

那么，影响 PCR 体系蒸发的因素都有哪些呢？

1、热盖压力、温度

为了防止 PCR 高温反应中试剂向上挥发，PCR 仪一般通过在试液孔板上方覆盖热盖单元，以上方高温来减少试剂的挥发。但热盖能完美解决蒸发问题吗？

PCR 仪的热盖大致可以分为以下四种：非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热盖和自动式热盖。而「可调节式热盖」利用手拧压紧式，拧不紧会发生试剂蒸发，一些厂家通过增加热盖压力以减少边缘蒸发，但该方法并不能完全消除这一现象，有时拧得过紧反而可能出现压坏管子、拧坏旋钮的情况，有的仪器甚至会因拧得过紧而导致试剂蒸发。也有一些厂家通过在热盖上增加软性导热材料来解决这一问题，但目前，软性导热材料的使用寿命无法明确。

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