【方法篇】通过标记手段分析蛋白N-肉豆蔻酰修饰

蛋白标记手段在研究和辨别蛋白发生修饰类型实验中有重要作用。

此篇介绍的是被称为肉豆蔻酰化的蛋白翻译后修饰位点，肉豆蔻酰化是一种由肉豆蔻酰CoA（后文简称NMT）催化的反应，将肉豆蔻酸（C14饱和脂肪酸）转移到蛋白质N端的反应。大肠杆菌是内源性不含有NMT，用来共表达NMT和被标记的目标蛋白，含有一个可以进行豆蔻酸反应的“点击”标签，此标签是一个功能集团，可以通过“点击”化学反应，例如叠氮化合物，可作为体外特异性位点标记的“手柄”。在此方法中提供了体内重组蛋白N端标记的实验方案，以及通过点击化学方法，可对蛋白进行亲和纯化和荧光检测。除了一般的N端蛋白标记外，此方法还可以用于研究相关蛋白本体豆蔻酰修饰，NMT酶的特异性，整个方法都无需放射性同位素。

图1

通过采用特异性和选择性方式标记蛋白质的手段是非常实用的，当然能够通过这样的方法确认蛋白所发生的修饰位点也是同样的。比如糖基化修饰、生物素结合、异戊二酰化、胆固醇化、磷酸化和脂质化等。此文中的方法采用了实用细菌作为转移酶表达的容器，随后目标蛋白和体内的天然小分子转移酶底物的化学标记模拟，如图1所示。此方