根据实验设计,细胞爬片后做TPA分化诱导,然后做免疫荧光和电生理。首要问题是爬片!
SY5Y细胞略难养,但该批次细胞状态较之前良好。在预实验中,曾尝试爬片。首先使用的是厂家生产的24孔无菌盖玻片,贴壁慢,且成团现象严重,状态很差。培养几天后密度极小且不增殖,一般丢弃。后换用普通盖玻片,经冲洗、泡酸、高压灭菌后浸泡入医用酒精中备用。接种后,细胞贴壁差,且盖玻片上有细小凌乱物质,效果依然不理想。
根据经验,SY5Y细胞接种到新的培养环境里,接种效果差在预料之中。但爬片效果实在是出乎意料的不理想。曾用玻璃培养瓶和包被有多聚赖氨酸的一次性培养瓶接种,后者接种后贴壁效果明显优于前者。使用过的培养瓶再次接种时,二者接种效果都非常好。另外一个比较有意思的现象,吹打过程中玻璃滴管尖端挂划过的的线路,都无细胞生长,是一条非常清晰的线。这说明,SY5Y在生长过程中会分泌类似于多聚赖氨酸等有助于贴壁的物质,再次接种时,贴壁效果非常好。
基于此,想到了两个解决方案,一:将爬片用的盖玻片包被多聚赖氨酸;二:将盖玻片事先浸泡在换液时收集的废液中,包被SY5Y分泌的物质。由于后者简易易行,便做了个实验,效果非常好。很有意思的一件事情!!
细胞爬片问题有进展
最新推荐文章于 2021-12-17 14:21:52 发布