Nature 正刊丨Transgelin 2保护T细胞脂质代谢和抗肿瘤功能

01摘要

对病原体和肿瘤的有效免疫依赖于细胞外脂肪酸对T细胞的成功代谢编程1,2,3。脂肪酸结合蛋白5（FABP5）在这一过程中起着关键作用，它协调脂质的有效输入和运输，为线粒体呼吸提供燃料，以维持保护性CD8+T细胞的生物能量需求4,5。然而，控制这一免疫代谢轴的机制尚未得到探索。在这里，我们报告说，细胞骨架组织者转蛋白2（TAGLN2）是CD8+T细胞中最佳脂肪酸摄取、线粒体呼吸和抗癌功能所必需的。TAGLN2与FABP5相互作用，促进其在活化的CD8+T细胞中的细胞表面定位和功能。对癌症卵巢标本的分析表明，肿瘤微环境诱导的内质网（ER）应激反应抑制浸润性CD8+T细胞中的TAGLN2，从而加强其功能失调状态。在ER应激的CD8+T细胞中恢复TAGLN2表达可增加其脂质摄取、线粒体呼吸和细胞毒性能力。因此，过表达TAGLN2的嵌合抗原受体T细胞绕过了肿瘤诱导的ER应激的有害影响，并在患有转移性卵巢癌症的小鼠中显示了治疗效果。我们的研究确定了细胞骨架TAGLN2在T细胞脂质代谢中的作用，并强调了通过保留TAGLN2-FABP5轴来增强实体恶性肿瘤细胞免疫治疗的潜力。

02图表简介

，FACS直方图和CD8+T细胞从无癌症妇女（n＝14）的外周血或OC患者的恶性腹水（n＝15）或外周血（n＝8）的脂质摄取（BODIPY 500/510）的定量分析。b、 c，来自无癌症妇女外周血的人幼稚CD8+T细胞通过CD3和CD8（CD3/CD28）刺激32小时激活，然后在不存在或存在50%HGSOC腹水上清液的情况下激活16小时。b、 通过FACS评估脂质摄取（n=5）。c、 通过逆转录qPCR（RT-PCR）测定FABP5、CD36和FABP4的表达，并将数据归一化为ACTB的内源性水平（n=5）。d–f，来自无癌症个体外周血的人幼稚CD8+T细胞通过CD3/CD28刺激激活，然后用所示mRNA电穿孔。细胞在所示治疗下扩增。FACS直方图和通过FACS测定的CD8+CD44+T细胞中FABP5总表达（d）、脂质摄取（e）和细胞表面FABP5表达（f）的定量分析（每组n=5）。g、 h、FACS直方图和从a.i-k中所述的相同标本分离的指定T细胞中细胞表面（g）和总（h）FABP5表达的定量分析、基于FACS的动力学分析（CD45+CD19-CD3+CD8+门控），在植入小鼠ID8-Defb29/Vegfa细胞（每组n=3）后第7、14或28天，指定T细胞从腹膜灌洗或网膜中表达的表面FABP5、总FABP5和脂质摄取（k）。数据以平均值±标准误差表示，采用Tukey多重比较检验（a，d–h）、双尾配对学生t检验（b）或双尾非配对学生t试验（c）进行单因素方差分析（ANOVA）。显示了精确的P值。n代表生物独立的样品。gMFI，几何平均荧光强度。

a、 使用STRING数据库生成的FABP5预测功能伴侣的蛋白质相互作用图。b、 IP-MS方法示意图。c、 IP-MS后分析中预测的FABP5相互作用蛋白的相对强度。d、 野生型活化CD8+T细胞中FABP5和TAGLN2的相互作用。来自三个独立实验的代表性图像。e、 指定基因型的活化CD8+T细胞的共聚焦图像被TAGLN2（绿色）、FABP5（红色）和DAPI（蓝色）染色。比例尺，50μm。f、 指示标记的共定位百分比（曼德斯系数）。g、 通过CD3/CD28刺激野生型幼稚CD8+T细胞24小时，然后用指定的mRNA对Neon进行电穿孔。48小时后，通过FACS测定CD8+CD44+T细胞表面FABP5表达的代表性直方图和定量分析（每种情况n=3）。灰色峰代表同种型对照染色。h、 实验方案和读数。i、 通过FACS测定CD8+CD44+T细胞中脂质摄取（BODIPY 500/510）的直方图和定量分析（每种情况n=3）。j、 k、指定脂肪酸（j）的相对丰度（占总脂肪酸含量的百分比）以及指定CD8+T细胞中棕榈烯酸和油酸（k）的定量（每种情况n=3）。l、 携带晚期ID8-Defb29/Vegfa-OC的小鼠恶性腹水上清液中的相对脂肪酸丰度。m、 n、指定组CD8+T细胞中油酸的相对丰度（m）和定量（n）（每种情况n=3）。使用k中所示的相同对照数据。数据以平均值±标准误差表示。双尾非配对学生t检验（f，g）或带Tukey多重比较检验的单因素方差分析（i，k，n）。显示了精确的P值。n代表生物独立的样品。IP，免疫沉淀；KO，淘汰赛；ND，未检测到；WB，蛋白质印迹。b和h中的图像是使用创建的

a、 按照指示处理CD8+T细胞。通过RT-PCR测定Xbp1s和Tagln2的表达水平。数据标准化为Actb（每种情况n=3）。b、 在a.c中描述的相同样本中，通过FACS测定的TAGLN2水平（每组n=3），如所示处理的CD8+T细胞中TAGLN2表达的代表性图像。比例尺，50μm。d–g，所示基因型的CD8+T细胞暴露于各种ER应激源。d、 通过RT-PCR检测Tagln2的表达。数据标准化为Actb（每个条件和基因型n=3）。e、 g、在指定条件下CD8+CD44+T细胞中TAGLN2表达的FACS分析（每个基因型n=3）。h、 通过RT-PCR测定Xbp1s和Tagln2水平。数据标准化为Actb（每种情况n=3）。i、 保留XBP1结合基序。小鼠和人类XBP1的数据分别来自之前的出版物52和JASPAR数据库（标识符MA0844.1）。j、 Tagln2启动子XBP1占据率的ChIP-PCR检测。不使用XBP1s结合区（NR）作为阴性对照（每种条件n=3）。k、 萤光素酶报告子检测表明XBP1s抑制Tagln2启动子（n=3）。l、 m，40天内携带基于PPNM的HGSC的指定基因型小鼠的网膜（l）和实体瘤（m）T细胞中TAGLN2表达的FACS分析（CD45+CD19-CD3+CD8+门控）（Xbp1fl/fl，n=5；Xbp1fl/llCd4core，n=8）。灰色峰表示同种型对照染色。n、 11例人类HGSOC标本中不同瘤内T细胞亚型的UMAP图。（TN样，T幼稚样细胞；TH1，T辅助1细胞；Treg，调节性T细胞；TFH，T滤泡辅助细胞；T早期活跃，早期激活的T细胞；TEM，效应记忆T细胞；TPEX，预耗竭T细胞；TEX，耗竭T细胞）。o、 来自未经治疗的HGSOC样本的CD8+肿瘤浸润效应记忆T细胞（TEM）的GSEA富集图。p、 q，来自HGSOC患者腹水的指定CD8+T细胞中XBP1s和TAGLN2表达的相关性分析（n=16）（p）和XBP1s与TAGLN2的表达（q）（n=14）。数据以平均值±标准误差表示，采用Tukey多重比较检验（a、b、d、f、h、k）、双侧非配对Student t检验（e、g、j、l、m）或Spearman秩相关检验（p、q）进行单因素方差分析。显示了斯皮尔曼系数（r）和精确P值（双尾）。n代表生物独立的样品。BS，结合位点；FDR，误发现率；NES，归一化富集评分。

03 参考文献
Liu Y , Qin Z , Yang X ,et al.High-Voltage Manganese Oxide Cathode with Two-Electron Transfer Enabled by a Phosphate Proton Reservoir for Aqueous Zinc Batteries[J]. 2022.

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