名称:酵母转化试剂盒(酿酒酵母专用)
英文名:Yeast Transformation Kit
储存条件:Carrier DNA -20 ℃保存,其它组分可室温保存,未开封有效期24个月。
感受态细胞制备:
1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线,30 ℃培养2-4天。
2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线,30 ℃培养2-4天。
3.待酵母单菌落长至直径2 mm时,把酵母细胞接种到3 mL YPDA液体培养基中,30 ℃过夜培养。
4.第二天转接到含有30-50 mL YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养,待OD600达到0.4-0.5,3000 rpm离心5 min,弃上清。
5.沉淀用30-50 mL的无菌的去离子水悬浮。3000 rpm离心5 min,弃上清。
6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc(150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL无菌水)重悬后转移至1.5 mL离心管中,3000 rpm离心5 min,弃上清。
注意:10 × LiAc Solution经过pH缓冲,无需添加TE作为缓冲剂。
7.加入1 mL 1 × LiAc重悬,小体积转化按照每管100 μL分装,用于文库转化不分装。
8.3000 rpm离心5 min,弃上清,感受态细胞即制备完毕。
注意:制备好的感受态最好立即使用,在第8步离心前,室温放置不应超过5小时。
转化预混液配制: