名称:酵母平板菌落快速转化试剂盒(一步法)
英文名:Yeast Transformation Kit
储存条件: -20 ℃储存,未开封有效期24个月。
描述:
酵母菌落快速转化试剂盒是以未经冻存的酿酒酵母平板菌落(无需摇菌)或者菌液作为菌体来源(短期4 ℃保存的平板或者菌液亦可使用),无需制备感受态细胞,无需分步热激,一步转化,整个操作流程在90 min内完成。省去了通过两次培养获得状态良好的菌体的过程,以及制备感受态的过程,节省了1-2天的菌种培养转化时间,或者购买感受态的经费。其转化率可达经典酵酿酒母转化方法(SK2400)的50-80%(常规酵母杂交菌种检测)。转化效率可满足除文库传化之外的其它转化实验。
菌落转化步骤:
1.在无菌的1.5 mL的离心管中加入100 μL的P1溶液(转化液)。
2.在上述转化液中加入1 μg的质粒DNA。共转加入每种质粒各1 μg。
3.挑取2-3个较大酵母菌落加入上述转化液中,震荡混匀。
4.置于42 ℃水浴60 min(每隔20 min 颠倒混匀一次,避免酵母菌沉底)。
5.可选步骤:3,000 rpm离心3 min,弃上清。用400 μL YPD Plus Liquid Medium(YT0004)重悬,30 ℃摇床震荡培养30-60 min。YPD Plus用于转化后复苏酵母菌,转化效率可以提高50-100%。
6.3,000 rpm离心3 min。加入100 μL无菌水重悬菌体。
7.将重悬菌体全部涂布于相应的缺陷型培养基平板上。
8.30 ℃恒温培养3-5天