免疫磁珠分选原理(链霉亲和素磁珠/链霉亲和素-生物素(SA-Biotin)/免疫沉淀磁珠Protein A/G)

本文详细介绍了免疫磁珠分选的原理,包括磁珠分选策略、细胞标记方式和不同类型的磁珠,如链霉亲和素磁珠、免疫沉淀磁珠Protein A/G等,用于细胞分选、抗体纯化和核酸提取等应用。
摘要由CSDN通过智能技术生成

免疫磁珠分选原理(链霉亲和素磁珠/链霉亲和素-生物素(SA-Biotin)/免疫沉淀磁珠Protein A/G)

  • 磁珠分选原理

磁珠分选是基于细胞表面抗原能与偶联抗体的磁珠特异性结合,从而使细胞被标记。标记好的细胞过柱子(柱子周围连磁铁)时,带磁珠的细胞就留在柱子上,不带磁珠的细胞就流走了,从而实现目的细胞的分选。

二、细胞标记方式

利用磁珠分选细胞的关键点就是高质量细胞标记。标记方式有两种,包括直接标记和间接标记。

1、  直接标记

直接标记就是标记目的细胞,是较快速、较特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。

2、  间接标记

间接标记就是标记非目的细胞,需要联合使用单克隆或多克隆抗体和微珠。未结合抗体、生物、生物素化抗体或荧光素标记抗体均可作为一抗标记细胞,再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠等作为二抗磁性标记细胞。

三、磁珠分选策略

根据细胞标记方式可以选择不同的磁珠分选策略。

1阳性分选

阳性分选是目的细胞被磁性标记,并直接分选出来,标记的细胞可富集10000倍。分选后的细胞不必去除微珠,可立即培养或后续操作,其优势是纯度高,回收率高,操作迅速,操作简便。

2阴性分选

阴性分选又叫去除分选,磁性标记非目的细胞,从而将非目的细胞从细胞混合物中去除。其适用范围包括以下几个方面:

① 去除不需要细胞;

② 缺乏针对目的细胞的特异性抗体(如肿瘤细胞);

③ 不需要抗体和目的细胞结合,如T细胞、B细胞、NK细胞功能分析;

④ 需要进一步通过阳性选择分选细胞亚群。

3复合分选

复合分选其实就是阴性分选和阳性分选的结合。如先阴性分选,去除非目的细胞&

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