液相分离在同位素标记代谢组学的应用

研究方向有：质谱蛋白质组学和代谢组学、阿尔茨海默病的分子发病机制、泛素和蛋白质组Turnover和癌症的系统生物学。

高通量非靶向代谢组学通常依赖于互补液相色谱-质谱（LC-MS）方法来扩大各种代谢物的覆盖范围，但这些方法的集成尚无法完全表征。我们系统地研究了8种LC-MS设置，不同固定相（HILIC和C18），流动相（酸性和碱性pH）下亲水相互作用液相色谱（HILIC）-MS和纳流反相液相色谱（nRPLC）-MS的性能）和MS电离模式（正负）。之前曾报道过nRPLC-MS的优化，但我们在HILIC-MS（2.1 mm×150 mm）中发现，通过从2 mg细胞/组织样本。由于峰特征受到污染物的高度损害，因此我们使用稳定同位素标记的酵母来增强配方鉴定，以比较不同的LC-MS条件。8种LC-MS设置可检测总共1050个配方，其中先佳组合分别为4种，3种和2种LC-MS可以回收78％，73％和62％的配方。此外，在存在或不存在氮饥饿的情况下收集这些酵母样品，从而能够对比较的配方和代谢物结构进行定量比较，然后使用选定的合成代谢物进行验证。

结果表明，氮饥饿会下调氨基酸成分，但会上调尿苷相关的代谢。

用两种不同的液相分离（亲水性和疏水性）和质谱联用的技术，鉴定老鼠以及酵母中的同位素代谢物。设定了较佳的鉴定参数，并且对正常酵母和氮饥饿的酵母样品，进行同位素代谢组学鉴定。

反相液相色谱法（reverse-phase liquid chromatography，RPLC）是代谢组学中较常见和实用的一种LC分离方法。但是缺点是对于强极性物质保留较差。亲水相互作用液相色谱（hydrophilic interaction liquid chromatography，HILIC）是近年来色谱领域研究的热点之一。

它通过采用强极性度固定相，并且结合高比例有机相和低比例水相作为流动相。此前文章报道的RPLC和HILIC是主要集中在特征峰的数目方面，还没有文章系统比较这两种方法在代谢组学上的鉴定和分析。

3C同位素标记的松柏醇葡萄糖甙 碳-13同