生物细胞培养需要的仪器、试剂、耗材、步骤、耗时和成本分析

在生物类实验中，一次细胞培养所需要使用的仪器、试剂、耗材、步骤、耗时和成本有多少?

一、仪器、试剂、耗材列表

 （一）仪器

1.  二氧化碳培养箱 ：为细胞提供稳定的温度（37℃）、湿度和二氧化碳浓度（5%）的环境。

2.  生物安全柜 ：提供无菌操作环境，防止细胞培养过程中的污染。

3.  离心机 ：用于细胞离心，例如复苏后离心去除冻存液等操作，转速通常在1000 - 1500rpm左右。

4.  倒置显微镜 ：用于观察细胞的形态、生长状态和密度，方便判断细胞是否健康和确定传代时机。

5.  恒温水浴锅 ：用于快速解冻冻存的细胞，温度一般设置为37℃。

6.  移液枪（多量程） ：准确吸取和转移细胞悬液、培养基、试剂等，量程包括10μL、200μL、1000μL等。

 （二）试剂

1.  DMEM高糖培养基 ：293T细胞生长的基本培养基，含有细胞生长所需的各种营养成分如氨基酸、维生素、葡萄糖等。

2.  胎牛血清（FBS） ：一般添加比例为10% - 15%，提供细胞生长的生长因子、激素等营养物质。

3.  青霉素 - 链霉素双抗溶液 ：添加比例为1%，用于预防细菌污染。

4.  胰蛋白酶 - EDTA消化液 ：用于消化细胞，使贴壁细胞从培养皿表面脱离。

5.  DMSO（二甲基亚砜） ：作为细胞冻存保护剂，降低细胞在冷冻过程中的损伤。

 （三）耗材

1.  六孔板 ：用于细胞培养，本案例主要使用对象。

2.  离心管（15mL、50mL） ：用于细胞离心、收集、转移等操作。

3.  移液枪头（各种规格） ：与移液枪配合使用，避免交叉污染。

4.  冻存管 ：用于细胞冻存，有1.8mL、2mL等规格。

5.  一次性无菌手套、口罩、帽子 ：保证操作过程的无菌性。

 二、细胞培养具体过程步骤

 （一）细胞复苏

1.  准备工作

   - 将恒温水浴锅预热至37℃，在生物安全柜中准备好含有预热（37℃）的完全培养基（DMEM高糖培养基 + 10% - 15% FBS+1%双抗）的离心管（15mL）。

   - 从液氮罐中取出装有293T细胞的冻存管，迅速放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃，使细胞悬液快速解冻，时间控制在1 - 2分钟，避免DMSO对细胞的毒性。

2.  离心洗涤

   - 将解冻后的细胞悬液转移至离心管中，加入适量的完全培养基，轻轻吹打混匀，1000 - 1500rpm离心5分钟。

   - 弃去上清液，加入适量的完全培养基，轻轻吹打重悬细胞。

3.  接种培养

   - 将重悬后的细胞接种到六孔板的一个孔中，加入适量的完全培养基，使细胞均匀分布，放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

 （二）传代培养

1.  观察细胞状态

   - 每天在倒置显微镜下观察细胞生长状态，当细胞融合度达到80% - 90%左右时，进行传代。一般293T细胞在合适条件下2 - 3天可达到此融合度。

2.  消化细胞

   - 弃去旧培养基，用PBS（磷酸盐缓冲液）清洗细胞一次，去除残留的培养基和血清。

   - 加入适量胰蛋白酶 - EDTA消化液，覆盖细胞表面，放入37℃培养箱中消化1 - 2分钟，在显微镜下观察到细胞变圆、开始脱落时，加入适量的完全培养基终止消化。

3.  细胞计数和分皿

   - 将消化后的细胞悬液转移至离心管中，轻轻吹打混匀，进行细胞计数。

   - 根据计数结果，将细胞按照一定比例（例如1:3或1:4）分到新的六孔板孔中，每个孔加入适量的完全培养基，放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。重复此传代过程5次。

 （三）细胞冻存

1.  冻存液准备

   - 配制冻存液，一般为含10%DMSO、20% - 30% FBS的DMEM高糖培养基。

2.  细胞收集和处理

   - 按照传代培养中的消化方法收集细胞，离心后弃去上清液。

   - 加入适量的冻存液，轻轻吹打重悬细胞，使细胞浓度达到合适范围（例如1 - 5×10⁶ cells/mL）。

3.  冻存操作

   - 将细胞悬液分装到冻存管中，每管1 - 1.5mL左右。

   - 将冻存管放入程序降温盒中，先放入 - 80℃冰箱过夜，然后转移至液氮罐中长期保存。

 三、资金成本范围

1.  仪器成本

   - 二氧化碳培养箱价格在2 - 5万元左右；生物安全柜价格在3 - 8万元左右；离心机价格在1 - 3万元左右；倒置显微镜价格在1 - 5万元左右；恒温水浴锅价格在1000 - 3000元左右；移液枪（一套）价格在2000 - 5000元左右。如果是实验室已有仪器，分摊到本次实验的成本相对较低，假设已有仪器，不计入本次实验的仪器成本。

2.  试剂成本

   - DMEM高糖培养基（500mL）价格在100 - 300元左右；胎牛血清（500mL）价格在1000 - 3000元左右；青霉素 - 链霉素双抗溶液（100mL）价格在100 - 200元左右；胰蛋白酶 - EDTA消化液（100mL）价格在200 - 500元左右；DMSO（500mL）价格在300 - 800元左右。按照本实验用量估算，试剂成本大概在1000 - 2000元左右。

3.  耗材成本

   - 六孔板价格在5 - 10元/个；离心管（15mL、50mL）价格分别在1 - 2元/个、2 - 3元/个；移液枪头（一盒）价格在100 - 300元左右；冻存管价格在1 - 2元/个；一次性无菌手套、口罩、帽子等价格在100 - 300元左右。按照本实验用量估算，耗材成本大概在500 - 1000元左右。

   - 综合估算，本次实验资金成本大概在1500 - 3000元左右。

 四、人工耗时范围

1.  细胞复苏

   - 复苏过程包括准备工作、离心洗涤、接种培养等步骤，熟练操作大概需要1 - 1.5小时左右。

2.  传代培养（5次）

   - 每次传代包括观察细胞状态、消化细胞、细胞计数和分皿等步骤，每次大概需要1 - 1.5小时左右，5次传代总共大概需要5 - 7.5小时左右。

3.  细胞冻存

   - 冻存过程包括冻存液准备、细胞收集和处理、冻存操作等步骤，熟练操作大概需要1 - 1.5小时左右。

   - 综合人工耗时大概在7 - 10.5小时左右。

五、小结

一次细胞培养，成本约1000 - 2000元；

生物细胞培养（六孔板293T细胞，复苏→传代5次→冻存）
项目	成本（元）
	DIY自制	项目技术外包
DMEM培养基	100	1000元起
牛血清	100
青霉素 - 链霉素双抗溶液	5
胰蛋白酶 - EDTA 消化液	300
DMSO	10
六孔板	50
离心管	30
移液吸头	100
无菌手套、口罩等	50
其他耗材	45
人工	10小时（1560元）	2小时（312元）
合计	2350	1312