IDT oligo使用说明

寡核苷酸序列（Oligo）合成已广泛应用于生物研究的各个方面，比如二代测序，PCR及基因编辑等。适当的保存条件以保持Oligo的稳定是确保后续实验结果可靠的重要前提。IDT自1987年便开始了Oligo的合成业务和对Oligo稳定性的研究。整体来讲，Oligo的保存受温度，储存形式，冻融次数和Oligo修饰等多种因素的影响，我们整理了关于 Oligo 保存的6点小建议，希望给大家提供参考。

1. 保存温度是“第一要素”

谈到Oligo保存，温度和储存形式是常规因素，温度尤为重要。-20℃条件下，无论是干粉，还是溶解在TE缓冲液（TE buffer）或无核酸酶水（Nuclease free water）中，Oligo均可稳定保存长达2年。

综上，对于保存Oligo的储存温度，-20℃冷冻保存是长期保存Oligo的最佳选择。

2. “和谁在一起”决定了Oligo“能走多远”

IDT研究发现，随着温度的升高，不同储存形式对Oligo稳定性的影响开始凸显。

IDT测试了“最差运输条件”（37°C），结果显示不同储存形式对Oligo稳定性的影响存在明显差异。其中，溶于无核酸酶水中的Oligo稳定性最差（约6周），干粉形式略优（约42周），溶于TE buffer中的Oligo稳定性最佳（约150周）。

基于以上数据，IDT推荐将Oligo溶解于TE buffer中长期保存。TE buffer（即IDT生产的IDTE），含有的Tris-HCl缓冲液可维持溶液在一定pH值范围内；含有的EDTA作为螯合剂可阻止核酸酶对Oligo的降解。客户可从IDT购买不同pH值（pH 7.5或pH 8.0）的IDTE。

3. 干粉Oligo并没你想的那么“干”

干粉形式的Oligo通常残留痕量的水分，随着时间的推移会导致DNA损伤。上文表明，如果选择室温保存，最好将Oligo溶解在IDTE里，会比干粉状态更为稳定。

注意：短期运输不会影响干粉形式oligo的稳定性，如前文所述，在“最差的运输条件”下，干粉形式oligo仍可在37℃下稳定存储40周以上。

4. “分开”始终是最好的选择

现实情况下，研究人员经常会对Oligo进行反复冻融。IDT对反复冻融后的Oligo稳定性进行了测试。方法如下：将IDT PrimeTime® qPCR Assay（包含引物和qPCR 探针）以40 X 储存液的浓度溶解在IDTE buffer中，反复冻融30次并以验证过的通用人类参考cDNA做标准曲线（0.005-50 ng）。 实验结果表明，Oligo组分在反复冻融30次后，对Cq值没有影响；图5表明，在经过ROX均一化校准的0.5ng cDNA的浓度下，Oligo组分冻融多达30次时，对Cq值无影响，且测试运行正常。

尽管冻融对Oligo的稳定性影响较小，IDT仍建议客户对Oligo进行梯度稀释，分装保存，减少污染的可能性。分装始终是长期保存的最好策略。

5. “修饰”与“未修饰”一视同仁

虽然IDT尚未对商品目录下所有修饰形式的Oligo进行保存条件的测试，但IDT现有的数据表明，修饰和未修饰的Oligo表现出相似的稳定性，预测大多数修饰不会对Oligo的稳定性造成影响。冷冻依然是修饰Oligo的最佳保存条件，高于冷冻温度时，IDTE可帮助维持其稳定性。

短期暴露于紫外线、可见光或者臭氧中，不会对带荧光修饰的Oligo产生影响，所以IDT会以透明的离心管保存运输这类Oligo。然而当对这些Oligo长时间保存时，IDT建议无论何种储存形式、温度都应避光保存。

再比如，NGSer 经常用到的5’生物素修饰的探针（xGen® Lockdown Probes）和捕获实验中的封阻序列（xGen® Universal Blockers-TS Mix，Catalog No. 1075474 ）本质都是带修饰的Oligo。如果在-20℃、TE buffer溶解、避免反复冻融的情况下，可稳定保存3年以上。

6. 脆弱的RNA Oligo，需要小心呵护

RNA Oligo的化学结构使其稳定性低于DNA Oligo，RNA酶则让RNA的保存条件更加苛刻。RNA酶无处不在：人类的唾液、粘液、汗液、死皮或毛细胞中都有RNA酶的踪影，常规实验室中的RNA酶远比DNA酶常见。避免RNA酶的污染是维持RNA Oligo稳定性的“重中之重”，微量的RNA酶即可造成RNA Oligo的大量降解。

IDT建议使用IDTE来短期存储RNA。若想对RNA Oligo长时间保存（数月以上），则需在-80℃条件下以沉淀的形式存储在乙醇中。

推荐阅读：IDT公司产品应用合集与产品预定​​​​​​​