lonza电转protocol 实验操作步骤

 

LONZA 4D-Nucleofector细胞核转染系统，即原德国Amaxa 4D-Nucleofector核转系统，结合电穿孔技术和细胞特异性转染液，通过系统内置优化的转染程序，将外源基因高效导入目标细胞的细胞质中，并可直接入核，整合到细胞染色体中。（微信搜索”泽平科技“公众号发送电转protocol获取教程视频）

Nucleofector核转系统可用于免疫细胞、干细胞、神经细胞、内皮细胞等较难转染的原代细胞和各类细胞系中，其不依赖于病毒感染、不依赖于细胞有丝分裂，可加快基因表达，已成功转染1200余种细胞系、130余种原代细胞，多数细胞系转染效率可高达50-70%，部分原代细胞转染效率可超过90%。目前，LONZA 4D-Nucleofector已大量应用于CAR-T细胞的研究中。

图.用Nucleofector细胞核转染系统，将GFP标记的质粒转染新生儿皮肤成纤维细胞（NHDF-neo），2小时后用3.5% PFA 固定，共聚焦显微镜可观察到GFP蛋白在细胞核内表达。

 

LONZA 4D-Nucleofector细胞核转染系统，配备多种转染模块，可满足不同细胞类型、不同数量、不同通量的转染实验需求；

电转过程中配合使用不同细胞类型专用转染试剂，转染效率远高于传统电转仪；

采用由新型高分子聚合物制造的电极，相比传统铝制电转杯，杜绝金属离子毒害，细胞转染后成活率更高。

为提高细胞核转染效率，优化转染条件必不可少，相比其他品牌，LONZA可提供全球共享的数据库，可检索到700种以上的细胞转染数据和操作手册，除转染操作指导外，还提供细胞来源、传代、生长条件、培养基、转染后细胞培养基等各类技巧，大大节省摸索时间和试剂耗材损耗。

4D-Nucleofector细胞核转染平台，在小体积转染条件优化成功后，可不改变转染条件，直接用于大体积转染中，一次获得最多1*10^9数量的细胞，大大缩短实验时间。

 

LONZA 4D-Nucleofector细胞核转染系统，由1个主机加不同模块构成，各模块可单独配置：

 

1.C模块（必选）：细胞核转染系统主机，即核心模块（Core unit），内置各类细胞转染程序。

 

2.X模块（可选）：最常选择的小体积转染模块，用于各类悬浮细胞转染。允许使用2个电极杯和1个中通量16孔电极板条。其中电极杯为100uL体系，适用于2*10^5至2*10^7数量细胞；16孔电极板条各孔为20uL体系，适用于2*10^4至1*10^6数量细胞，可同时转染16个样品。

 

3.Y模块（可选）：用于各类贴壁细胞的原位转染，无需消化细胞。允许使用1个24孔电极板，各孔为350uL体系，可同时转染24个样品。

 

4.LV模块（可选）：用于一种细胞的大规模连续转染。允许使用电转盘，其中小体积电转盘允许手动注射填充1mL，适用于1*10^7至1*10^8数量细胞；更大体积的电转盘允许以1mL体积不断进样，配合储液罐或储液袋，连续处理20mL体积，最高可转染10^9数量细胞。

 

5.96孔模块（可选）：用于高通量细胞转染，需要同时配置X模块。允许使用1个可拆卸的96孔电极板，由6个16孔电极板条组成，适用于2*10^4至1*10^6数量细胞，可同时转染96个样品，经常用于摸索转染条件。

 

相关文献

 

Ribonucleoprotein Transfection for CRISPR/Cas9-Mediated Gene Knockout in Primary T Cells.(Curr Protoc Immunol,2019,124(1):e69)

 

Engineering of CRISPR-Cas12b for human genome editing.(Nature,2019,10(1):212)

 

CRISPR-Cas9 genome engineering of primary CD4+ T cells for the interrogation of HIV-host factor interactions.(Nat Protocols,2019,14(1):1-27)

 

Bacteria-free minicircle DNA system to generate integration-free CAR-T cells.(J Med Genetics,2019,56:10-17)

 

Guide Swap enables genome-scale pooled CRISPR-Cas9 screening in human primary cells.(Nat Methods,2018,15(11))

 

Nucleofection with Plasmid DNA for CRISPR/Cas9-Mediated Inactivation of Programmed Cell Death Protein 1 in CD133-Specific CAR T Cells.(Hum Gene Ther,2018)

 

Optimized RNP transfection for highly efficient CRISPR/Cas9-mediated gene knockout in primary T cells.(J Exp Med,2018,215(3):985-997)