DSPE_PEG-CSDN博客

原创 DSPC是一款在药物制剂等多领域应用较广的磷脂

DSPC是一款纯度可做到99%的全合成PC磷脂，也就是磷脂酰胆碱，CAS号为816-94-4的DSPC是很好的膜材选择，在复方脂质体中的应用可不少，比如：柔红霉素、伊立替康。DSPC稳定性较HSPC更佳，可完全替代HSPC，但价格成本更高。DSPC用法:与其它磷脂辅料-起溶于适当有机溶剂，60°C水浴下旋蒸、抽真空得脂质薄膜，然后进行后续的水合、整粒、载药等操作。DSPC用法:与胆固醇一起溶于适当有机溶剂，55°C水浴旋蒸、抽真空制膜，然后进行后续的水合、整粒、载药等操作。

2024-06-14 17:32:34 205

原创阳离子脂质DLin-M-C3-DMA：二甲氨丁酸二亚油甲酯

利用这些特性，DLin-M-C3-DMA用来制备阳离子脂质复合物，应用于核酸药物递送，具有“低毒高效”的优点，在众多可电离的阳离子脂质中，DLin-M-C3-DMA被认为是应用广的阳离子脂质。因此，DLin-M-C3-DMA是由二甲氨基丁酸和二亚油基甲醇缩合而成的脂肪酸酯，根据酸名列前，盐基（或碱基）列后的原则，将DLin-M-C3-DMA命名为“二甲氨丁酸二亚油甲酯”。DLin-M-C3-DMA的羧酸部分为二甲基氨基丁酸结构，因此DLin-M-C3-DMA的羧酸部分定为“二甲基氨基丁酸”。

2024-06-14 17:26:51 89

原创从辅料角度提高mRNA-LNP稳定性的几点考量主要包括以下几个方面

特别地，Tris/Tris-HCl缓冲体系在冷冻条件下表现出更好的稳定性，能避免pH值漂移，从而保护mRNA分子的稳定性。从辅料角度提高mRNA-LNP的稳定性需要综合考虑缓冲体系、RNase free级别的辅料、糖类保护剂、冷冻/冻干保护剂以及辅料与原料药的相容性等多个方面。辅料的理化性质如pKa、冻干特性以及冰点等将影响其与原料药的相互作用，进而影响制剂的有效性和稳定性。为提高mRNA分子的稳定性，应选用RNase free级别的辅料，以避免RNA酶污染导致的mRNA降解。一、选择适合的缓冲体系。

2024-06-14 15:58:36 210

原创探索阳离子可电离脂质纳米颗粒的稳定性

此外，靶向脂质纳米颗粒的长期储存，特别是那些负载了生物分子（例如蛋白质或核酸）的纳米颗粒是市场应用的另一个瓶颈。同时，脂质是热敏分子。为提高LNP的稳定性，聚乙二醇化（PEGylation）常用于减少蛋白质冠的形成，延长LNP在血液中的循环时间。人们已经进行了较多的努力来发展可替代PEG的材料，以提高靶向LNP的稳定性并延长其在体内的循环时间，同时又可以被降解以消除对免疫原性的担忧。因此，纳米颗粒的大小和稳定性动力学通常用于评估靶向LNP的稳定性，比如通过凝胶电泳来考察核酸/蛋白质在生理环境中的降解情况。

2024-06-14 15:40:43 246

原创可电离的阳离子脂质体辅料DLin-MC3-DMA

研究发现，可电离的阳离子脂质体纳米颗粒可以通过静电作用封装具有聚阴离子中心的siRNA以形成LNPs/siRNA复合物，该复合物在被靶细胞内吞的过程中能够有效地保护siRNA逃离核酸酶的降解﹐从而使其顺利进入细胞质内，然后LNPs/siRNA复合物发生分离，相应的siRNA发挥其功效。可电离的阳离子脂质体DLin-MC3-DMA是一种高效的siRNA运输载体,它能有效封装相应的siRNA并使其进入细胞质内,然后两者分离,siRNA发挥其功效。

2024-06-14 15:00:04 136

原创靶向脂质纳米颗粒的制备策略及操作

表面修饰策略是通过在脂质纳米颗粒表面修饰特定的配体，如抗体、抗原或配体等，以实现与目标细胞或组织的特异性结合。这种策略的操作步骤如下：首先，选择适当的配体，如抗体，并根据需要进行必要的预处理，如活化或偶联反应。最后，对修饰后的靶向脂质纳米颗粒进行纯化，以去除未反应的配体和杂质，得到纯净的靶向脂质纳米颗粒。首先，制备具有特定物理性质的脂质纳米颗粒，如带有正电荷或负电荷的纳米颗粒。例如，可以将表面修饰和物理吸附策略结合起来，首先在脂质纳米颗粒表面修饰特定的配体，再利用物理吸附将药物吸附到纳米颗粒表面。

2024-06-13 16:21:11 178

原创脂质体辅料分类有哪些：衍生化磷脂、合成和半合成磷脂等

脂质体的冻干工艺中，蔗糖和海藻糖是常用的两种保护剂。英文名：Sucrose octasulfate X，有实验表明使用蔗糖八硫酸酯X盐载药，药物治疗指数、生物利用度、释放及药时曲线等体内行为都有改善，因此盐酸伊立替康脂质体Onivyde®选择其作为梯度载药。天然磷脂含大量不饱和键易被氧化，往往无明显相转变温度，而且每种天然磷脂均是同类磷脂的混合物，化学上不是单组分，平均分子量约700。更适宜于研究和生产，如二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰基磷脂酰胆碱（DOPC）等，是应用多的脂质体骨架膜材。

2024-06-13 16:06:57 346

原创脂质纳米颗粒（LNP）作为一种药物递送系统的潜力与前景

LNP的脂质成分中，可电离脂质在低pH值下带正电，使得LNP能够紧密地结合并保护带负电荷的mRNA。值得注意的是，LNP在mRNA疫苗的研发中取得了显著的成功。而LNP可以有效地保护mRNA，避免其被降解，同时将其精准地递送到细胞内，从而实现高效的基因表达。此外，LNP中的聚乙二醇化脂质和胆固醇等成分，可以稳定纳米颗粒的结构，减少血清蛋白的调理作用和网状内皮系统的清除，从而增加药物在体内的半衰期和生物利用度。随着纳米技术的发展，脂质纳米颗粒（LNP）作为一种创新的药物递送系统，正日益受到人们的关注。

2024-06-13 15:47:32 175

原创合成磷脂DLPC二月桂酰基卵磷脂有什么作用？

在药物制剂中，二月桂酰基卵磷脂DLPC因其优良的生物相容性和双亲性质，不仅在脂质体研究中发挥重要作用，还在固体脂质纳米粒（SLN）、纳米结构脂质载体（NLC）等新型药物递送系统中广泛应用。在脂肪乳、乳化剂领域也得到很好的应用。二月桂酰基卵磷脂DLPC，一款纯度高至99的合成磷脂，化学名称1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱的它，英文化学名：1,2-Dilauryl-sn-glycero-3-phosphocholine，作为一款试剂级别辅料，分子式为C32H64NO8P，分子量在621.85。

2024-06-13 15:14:01 223

原创脂质体作为药物载体有多种功效：对阿尔茨海默症的功效

本实验作者将EPC、Chol、DSPE-PEG2000、ICA、TSIIA和DSPE-PEG2000-Ang2（26.18:1:0.069:0.071:0.164:0.038，摩尔比）溶解在氯仿中，在负压下使用旋转蒸发器，40℃下蒸发以形成脂质体悬浮液以获得薄膜。因此，Ang2-ICA/TSIIA 脂质体被认为是阿尔兹海默症的潜在有效治疗策略。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25~1000nm不等的脂质体可用作疏水性、亲水性和两亲性药物的载体。

2024-06-13 14:48:03 821

原创 mRNA-LNPs的制备与检测方法

隐形”脂质常用PEG分子，虽然PEG常被认为是非免疫原性的，但抗PEG抗体已经被检测出来，它的出现会加速LNPs的血液清除并激活经典的补体途径，因此，PEG脂质的占比不能太高；mRNA溶解于PH 4.0的柠檬酸钠（浓度不高于0.1M）缓冲液，四脂质成分溶解于无水乙醇中，两相即可按特定的比例在微流控设备上进行快速合成。mRNA-LNPs的大小和均匀性可通过动态光散射来验证，表面电荷通过ζ电位测量来确定，酶标仪可用来测定样品的包封率，RNA凝胶则可验证有效载荷的纯度及稳定性（图1）。

2024-06-12 14:32:20 97

原创脂质纳米颗粒中各成分的作用 -中性脂质DOPE、DSPC、DOPC等

中性脂质又称为辅助型脂质，常见的有DOPE、DSPC、DOPC等。与其他组分相比，针对中性脂质的研究相对较少，其在配方中的占比为总脂质的10%−20%。中性脂质常作为LNP配方的结构脂质，因为它们可以自发地组织成脂质双层，且较高的相变温度可增强LNP的膜稳定性，与之相对应，LNP在内涵体逃逸时，其又能破坏内涵体稳定性，提高核酸递送效率。LNP的诸多结构及生物学特性并不仅仅归因于单一的脂质成分，而是各类脂质的组合。因此，本文将着重描述不同的脂质成分在LNP制备中的作用，本次分享的是中性脂质。

2024-06-12 14:17:04 212

原创脂质纳米颗粒中各成分的作用 -胆固醇

当与具有低凝胶-液晶相变(Tm)的脂质结合时，胆固醇有助于形成液序相，其特征是膜流动性降低、双分子层厚度增加(图1)，胆固醇和低Tm脂类发生“凝结”，因此脂类和胆固醇的横截面积低于单个横截面积的总和。另外，胆固醇可显著减少LNP表面结合蛋白的数量，并改善循环半衰期。因此，相对于内源性膜，LNP配方中含有等量的胆固醇可以防止净流出或流入，并保持膜的完整性。LNP的诸多结构及生物学特性并不仅仅归因于单一的脂质成分，而是各类脂质的组合。因此，本文将着重描述不同的脂质成分在LNP制备中的作用，本次分享的是胆固醇。

2024-06-12 14:10:26 125

原创脂质纳米颗粒中各成分的作用-PEG脂质

图1的电镜图中不难看出，当PEG脂质占比提升时，LNP的粒径有较明显的下降。此外，PEG脂质在一定程度上控制LNP的循环时间及其与细胞间的相互作用。选择哪一种PEG 脂质高度取决于治疗目的、靶器官和/或细胞类型以及给药途径，并应考虑构成脂质尾巴的烷基/酰基链的摩尔比和长度，研究表明这些参数都会影响LNP的关键特性。LNP的诸多结构及生物学特性并不仅仅归因于单一的脂质成分，而是各类脂质的组合。因此，本文将着重描述不同的脂质成分在LNP制备中的作用，本次分享的是PEG脂质。

2024-06-12 14:01:02 98

原创脂质纳米颗粒中各成分的作用 -阳离子脂质ALC-0315、SM-102、MC3

此外，阳离子脂质也能在核内体摄取中发挥重要作用：或直接通过某些脂质上的正电荷与带负电荷的细胞膜之间相互作用，或通过与支持细胞摄取的血浆蛋白结合发挥作用。图1为三种不同的阳离子脂质。开发出一款有效的阳离子脂质并非易事，需要考虑生物降解性、耐受性、蛋白表达和免疫原性等诸多问题，并且用于包裹siRNA的阳离子脂质，不一定适用于DNA和RNA的包裹。LNP的诸多结构及生物学特性并不仅仅归因于单一的脂质成分，而是各类脂质的组合。因此，本文将着重描述不同的脂质成分在LNP制备中的作用，下面介绍阳离子脂质的作用。

2024-06-12 13:53:05 155

原创基于脂质载体的mRNA疫苗递送系统研究进展

另外脂质载体通常会含有对mRNA细胞内转运有利的重要的功能性脂质成分。组成脂质的材料包括2-二油酰基羟丙基-3-N，N，N-三甲胺氯（DOTAP）、胆固醇（Chol）、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000（DSPE-PEG）、二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）、二硬脂酰基磷脂酰胆碱（DSPC）、聚-（β-氨基酯）聚合物（PBAE）、1，2-二油酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱（EDOPC）、1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-［甲氧基（聚乙二醇）-2000］（C14-PEG2000）。

2024-06-11 16:21:53 167

原创阳离子水凝胶：定义、特性及多元应用场景

例如，阳离子水凝胶可以作为药物载体，直接注射或植入到组织中，形成稳定的药物储库，从而提高药物在病灶部位的浓度，实现更为精准和高效的治疗。阳离子水凝胶是一种特殊的高分子材料，由阳离子聚合物在水中形成的凝胶材料所构成。同时，阳离子水凝胶还表现出良好的稳定性，即使在复杂或变化的环境中也能保持其结构和功能的完整性。首先，在水处理领域，阳离子水凝胶可以作为高效的吸附剂，用于去除水中的重金属离子、有机污染物等有害物质，提升水质。在农业领域，它可以作为肥料或农药的载体，提高肥料和农药的利用率，减少环境污染。

2024-06-11 15:43:58 129

原创探索阳离子脂质体在基因治疗中为什么是理想载体

制备过程中，通常需要将阳离子脂质和中性辅助脂质在适当的条件下进行混合和复合，形成稳定的脂质体结构。在基因治疗领域，阳离子脂质体作为基因载体已经得到了广泛的应用，并展现出了良好的应用前景。随着研究的不断深入和技术的不断进步，阳离子脂质体有望在基因治疗领域发挥更加重要的作用。3、稳定性好：阳离子脂质体在体外具有较好的稳定性，能够保护包裹的外源基因免受环境中不利因素的破坏，如酶解、氧化等。2、副作用小：相较于其他基因载体，阳离子脂质体的毒性较低，对细胞损伤小，因此减少了治疗中可能出现的副作用。

2024-06-11 14:38:49 169

原创二油酰丙基氯化三甲铵（DOTMA）的优点和缺点

它具有诸多优点，如对核酸的高包载效率、高基因转染效率、较低的细胞毒性和适用于GMP大规模生产的特性。然而，与此同时，也存在一些不容忽视的缺点，例如价格较高、转染效率可能不如某些新型可电离阳离子脂质以及目前尚未完全走出实验室研究阶段。二油酰丙基氯化三甲铵（DOTMA）在基因疗法和药物输送领域表现出显著的优势，但由于其仍处在实验室研究阶段，尚未完全走出实验室，走向临床应用。此外，也需要进一步优化生产流程，以提高产量和质量，并降低生产成本，使其更具有市场竞争力。二油酰丙基氯化三甲铵缺点： 1、价格较高；

2024-06-11 14:30:57 171

原创核酸递送载体阳离子脂质材料DOP-DEDA的研究与应用

DOP-DEDA作为mRNA疫苗的递送载体，能够提高疫苗的免疫原性，降低接种剂量，为疫苗研发提供有力支持。在众多阳离子脂质材料中，DOP-DEDA凭借其独特的物理化学性质及生物相容性，成为了一种颇具潜力的核酸递送载体。此外，DOP-DEDA还具有较好的生物相容性，可在体内降解，降低对生物体的毒性影响。例如，在药物递送系统中，DOP-DEDA可作为药物分子的载体，将药物高效递送至病灶部位，提高治疗效果。此外，DOP-DEDA还可应用于细胞成像、生物传感器等领域，为生物医学研究提供新的工具和方法。

2024-06-11 14:18:31 198

原创脂质体包裹之DLin-MC3-DMA与DOP-DEDA

这一过程中，DLin-MC3-DMA的特定化学结构，如双链烷烃链和胺基，将影响脂质体的稳定性和包封效率。2、包封效率与稳定性：由于化学结构的差异，DOP-DEDA的包封效率和脂质体的稳定性可能与DLin-MC3-DMA有所不同，因此需要针对DOP-DEDA的特点进行制备条件的优化。1、结构差异的影响：DOP-DEDA的碳链长度、支链或其他功能基团可能影响其在脂质体双层膜中的分布和稳定性，因此在制备过程中需要特别注意这些差异。

2024-06-07 17:20:58 130

原创 DSPG-Na与DOPG合成磷脂的对比研究

药用磷脂中的PG磷脂虽然在应用广度上不及磷脂酰胆碱（PC），但其特殊的结构和理化性质使其在某些关键制剂的开发中发挥着不可或缺的作用，尤其是在脂质体的制备中。然而，在实际应用中还需要根据具体的药物和制剂要求来选择合适的磷脂种类和工艺条件，以充分发挥脂质体的优势并实现药物的有效传递。同时，对于脂质体的制备工艺和性能评价也需要进行更深入的研究和优化，以提高脂质体在药物研发中的应用效果。在制备脂质体的过程中，首先需要确定合适的磷脂种类和比例，以确保脂质体的稳定性和载药量。

2024-06-07 17:10:42 190

原创 DSPC磷脂在脂质体微泡造影剂辅料中的应用探索

造影剂是一种用于医学影像诊断的物质，通过其特殊的物理或化学性质，能够增强影像的对比度，帮助医生更准确地判断病情。而脂质体微泡造影剂则是利用脂质体的包裹作用，将造影剂包裹在内部，以提高其在体内的稳定性和分散性。与传统的HSPC磷脂相比，DSPC的稳定性更佳，能够确保脂质体在复杂的生物环境中保持结构的完整性，防止造影剂的泄漏。此外，DSPC的高纯度合成工艺也保证了其在应用中的安全性和有效性。其中，合成磷脂DSPC（二硬脂酰磷脂酰胆碱）以其独特的分子结构和优异的性能，在脂质体微泡造影剂辅料中得到了广泛的应用。

2024-06-07 17:00:06 192

原创 DOPE在阳离子脂质体制备过程中的协同作用原理解析

4、DOPE作为一种重要的膜融合促进剂，能够增强阳离子脂质体与细胞膜之间的相互作用，从而显著提高脂质体被细胞摄取的效率。由于其能够形成疏水区域，有助于隐藏或保护包裹在脂质体内的药物或基因免受血液中中性粒细胞等免疫细胞的攻击，从而有可能延长循环时间，增加脂质体到达作用部位的机会。3、能够确定核酸+脂质体复合物的形态，可是脂质体结构从多相Lα相跃迁到六角HII相，使复合物具有良好的可融性，能提高跨膜效率。2、干扰类脂膜，使内涵体膜不稳定：在细胞内能促进DNA、RNA的释放，同时辅助阳离子脂质体的细胞渗透。

2024-06-07 16:52:46 159

原创蛋黄卵磷脂PL-100M与PC-98T的用途及区别

如果你的应用需要较好的乳化性能，例如在制备大多数脂肪乳时，那么PL-100M可能是一个更好的选择。如果你的应用更侧重于脂质体的制备，或者你的产品是特定类型如前列地尔脂微球，那么PC-98T可能是更适合的选择。三、考虑乳化性能：PL-100M的PC和PE比例接近天然蛋黄中的比例，因此具有较好的乳化性能。但这在某些特殊应用中是可接受的，甚至是必需的，例如在前列地尔脂微球的制备中。有时候，高纯度的产品可能会带来更高的成本，但如果其性能更符合你的应用需求，那么这种成本可能是合理的。

2024-06-07 16:45:43 201

原创 DLin-MC3-DMA与DOP-DEDA两款阳离子脂质材料的区别

DLin-MC3-DMA与DOP-DEDA在化学结构、脂质体特性、与核酸的相互作用、细胞摄取与转染效率、毒性与生物相容性以及应用领域等方面均存在显著差异。同时，为了确保安全和有效性，对这些材料的性能进行全面的评估和优化也是至关重要的。2、DOP-DEDA：其化学结构可能与DLin-MC3-DMA不同，可能包含不同的碳链长度、支链或其他功能基团，从而导致其在物理和生物学性能上的差异。1、DLin-MC3-DMA：由于其特定的理化性质，可能具有高效的细胞摄取能力，以及良好的转染效率，尤其是在特定的细胞类型中。

2024-06-06 20:15:24 328

原创阳离子脂质体常用种类及在基因治疗中的应用现状和优势

阳离子脂质体通常由一种阳离子脂质和一种中性辅助脂质在适当的条件下复合而成，阳离子脂质体转染效率与阳离子脂质的组成密切相关。在基因治疗中，基因载体是外源基因得以进入受体细胞的关键，其中，阳离子脂质体目前被认为是靶向性好，副作用小，稳定性好和转染效率较高的理想载体。随着技术的不断发展，阳离子脂质体作为一种安全、有效的基因传递系统，有望在未来的基因治疗中发挥更大的作用。阳离子脂质体作为基因载体的优势在于其能够形成稳定的复合物，保护DNA免受核酸酶的降解，同时还能提高转染效率。2、阳离子脂质体在基因治疗中的应用。

2024-06-06 19:59:26 310

原创阳离子脂质体与DOPE的结合提高基因转染效率

DOTAP（溴化三甲基-2, 3-二油酰氧基丙基铵）、DOTMA（氯化三甲基-2, 3-二油烯氧基丙基铵）、DC-Chol（3β-[N-（N’，N’-二甲基胺乙基）胺基甲酰基]胆固醇）是较为常用的阳离子脂质，但单独形成脂质体稳定性、膜融合性、转染效率差，所以常需要添加辅助脂质。这是因为在基因治疗的研究和实践中，阳离子脂质体与DOPE的结合被广泛验证能够显著提高载体对DNA的压缩能力，增强其对细胞的穿透力，并有效提高转染效率。在已经商品化的阳离子脂质体中，大部分都使用了DOPE为辅助脂质。

2024-06-06 19:50:59 258

原创 DSPE-mPEG2000的长循环性能及应用指南

一方面，PEG分子可在脂质体表面形成一层水化膜结构，减少了脂质体与血浆中的蛋白、酶等成分的结合，从而增强了其在血液中的稳定性。另一方面，PEG链在脂质体表面交错覆盖，形成了柔软的毛刷状构象，这可以阻碍蛋白、抗体、细胞等的吸附和黏附，有效避开了RES的识别和吞噬。这两方面的作用共同延长了药物在体内的循环时间，提高了药物的治疗效果。例如，在制备长循环脂质体的过程中，DSPE-mPEG2000能够使得脂质体经静脉注射后不会马上被MPS丰富的组织捕获，从而在血液中循环时间延长，增加了药物进入病理组织中的机会。

2024-06-06 17:05:59 186

原创 DPPC作为药物辅料的应用场景主要有三个方面

在药物制剂中，温敏脂质体能够通过温度调控药物的释放，从而实现药物的靶向输送。例如，在Celsion公司开发的热敏脂质体ThermoDox中，DPPC占据了膜成分的90%，该制剂与射频消融技术联合使用时，能够显著提高目标部位阿霉素原药浓度，达到10倍的增幅。例如，在全氟丙烷脂微球混悬液Definity中，DPPC作为包膜材料的重要成分，有助于维持气泡的稳定性，从而确保了造影剂的有效性和安全性。通过将DPPC作为这些载药系统的辅料，可以改善药物的溶解性、稳定性和生物利用度，从而提高药物的疗效和降低副作用。

2024-06-06 16:55:37 228

原创第三代阳离子脂质--可生物降解脂质

Alnylam在DLin-MC3-DMA的脂质尾部引入酯键得到了可生物降解脂质L319，与DLin-MC3-DMA相比，该脂质在体内表现出更好的递送效率和更快地从肝脏和血浆中清除。早在2014年，中科院化学所汗铭团队和美国塔夫茨大学许巧兵团队便设计合成了同时包含酯键和二硫键的可生物降解脂质用于递送SiRNA，证明此种结构比非二硫键的脂质体具有更好的递送效率，同时，递交了PCT申请保护该结构通式的平台。除上述可生物降解脂质外，阳离子脂质疏水尾部还可插入其他类型的生物降解基团，如酰胺等，此处我们并未穷尽。

2024-06-05 21:08:28 258

原创第二代阳离子脂质--可电离脂质

彼时，LNP领域存在一个亟待解决的问题--治疗窗口太窄，随着剂量提升毒性出现非常陡峭的急剧增加，为了找到能提高LNP安全和活性的新型可电离脂质，Alnylam与Pieter Cullis以及两名前Inex员工Thomas Madden和Michael Hope建立了合作关系，成立了一家名为AICana的公司，开始了对新型可电离脂类的探索，最终发现了MC3脂类(包含DLin-MC3-DMA)Alnylam针对MC3脂类和特定的DLin-MC3-DMA均递交了专利申请进行保护，相应专利预计2030年到期。

2024-06-05 20:56:09 226

空空如也

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