地高辛(DIG)标记的cRNA探针是一种重要的工具,用于检测和识别细胞和组织中的基因表达。这种探针是由cDNA克隆的5端和3端序列与地高辛标记的RNA连接组成的。
地高辛是一种合成的四环碱,属于氨基糖苷类抗生素。它应用于医学、生物医学和分子生物学领域,包括在基因和蛋白质组学研究中作为探针标记物。地高辛标记的cRNA探针具有高灵敏度、高特异性和高稳定性等优点,使其成为基因表达分析的理想工具。
地高辛标记的cRNA探针制备过程包括将目标基因的cDNA克隆与地高辛标记的RNA进行连接。这种连接是基于碱基互补配对原理实现的,因此保证了探针与目标基因的高特异性结合。此外,地高辛标记的cRNA探针还有高稳定性,可以在室温下保存数月而不损失其活性。
基因表达调控的研究中,RNA聚合酶Ⅱ转录生成的mRNA前体(pre-mRNA)需要进行一系列的加工和修饰才能成为具有功能的mRNA。在这些加工和修饰过程中,一个重要的步骤是5'端帽子修饰和3'端多聚腺苷酸尾巴的添加。然而,除了这些常见的修饰外,pre-mRNA还可以经历一种称为二聚cRNA(DICER-dependent RNA)的加工过程。这种加工过程涉及将pre-mRNA的5'端和3'端剪切并连接起来,形成一个双链RNA分子,该分子被称为二聚cRNA。
二聚cRNA的形成是通过一种称为DICER的酶催化的。DICER是一种具有内切核酸酶和外切核酸酶活性的酶,它能够识别pre-mRNA的5'端和3'端并切割它们。切割后,DICER将两个RNA片段拉近并连接起来,形成二聚cRNA。这个过程需要一种称为AGO2的蛋白质参与,它能够将生成的二聚cRNA从DICER上释放出来。
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以上资料来自昊然小编MSQ.2023.11.20