抗体开发之物种选择

这篇文章我们主要从以下三个角度来阐述抗体开发中常用物种差异对抗体的影响：

1. 物种进化差异
2. 抗体多样性机制差异
3. 物种个体差异

物种进化差异

羊驼与人及其他物种亲缘关系远，对免疫原的特异性明显，因此是非常好的免疫动物选择。但羊驼饲养局限和价格，限制了后期开发成本和周期控制；另外羊驼抗体的后续开发更大程度上依赖噬菌体展示平台，较难普及扩大推广（平台自身特性我们在抗体开发平台里再单独介绍）；

（http://lifemap-ncbi.univ-lyon1.fr）

 而兔和鼠的饲养条件相对宽松，兔和人之间的进化比鼠和人之间的时间相对要长，因此与鼠相比，兔更易产生能够与人、鼠直系同源物交叉反应的抗体，这在应用于人类疾病小鼠模型（基础研究和临床前研究）中非常有意义，同时也避免了使用鼠源一抗后，再使用抗鼠二抗与样本内源交叉反应的问题。

抗体多样性机制差异

（Lam JH, et al. J Immunol. 2019）

对于抗体的多样性产生，一般由B细胞在早期通过不连续的基因片段：可变（V）、多样性（D）和连接（J）基因片段的重排产生差异化，然后在滤泡生发中心（GC）进行体细胞高频突变（SHM）进一步产生多样化的抗体库。

（https://bsse.ethz.ch/lsi/research/systems-immunology.html）

 基于V(D)J基因上不同片段的组合多样化，体细胞高频突变（SHM），同时可变重链 (VH) 和可变轻链 (VL) 的组合配对提供了额外的抗体多样化，所有这些多样性因素结合起来理论上可产生>10的13次方的抗体库容。

 （Lanning DK, et al. Results Probl Cell Differ. 2015）

不同的是，相比人和鼠，兔的B细胞(上图右)在V(D)J基因重排过程中优先利用一小部分V基因片段，然后B细胞离开骨髓迁移到肠道相关淋巴组织(GALT)中增殖，除了借助体细胞高突变，还有另一种胞苷脱氨酶 (AID) 介导的基因转换机制：通过让V(D)J上胞嘧啶（C）转变为尿嘧啶（U），基于基因修复引入突变，进一步增加了抗体多样性和亲和力，因此兔单抗可以很容易地识别磷酸肽、糖类、半抗原和小分子。图示兔阑尾(兔GALT的主要部位)的组织切片，正在增殖的B细胞染成绿色，未增殖的B细胞染成红色。

物种个体差异

（Weber J, et al. Exp Mol Med. 2017）

 由于大多数小鼠品系是近杂交系，通常引起较少的多样性免疫反应；另外兔子的体型更大（实验用兔子体重平均2.5kg，小鼠25g左右），兔脾脏大概是小鼠的50倍，这有助于收集更多的免疫B细胞，和产生更多差异阳性抗体；兔抗具有更简单的IgG亚型类型便于工程改造，更稳定的IgG结构（小鼠IgG主要有5个亚类，然而兔没有IgG的亚类，此外，兔轻链κ1占有所轻链90%，并且κ1可变区中C80和C171之间存在链内二硫键，使兔单抗更稳定）。

兔抗特点汇总

 稳定性：兔抗的轻链可变区和恒定区之间有额外的二硫键，使得稳定性更高；

亲和力：Epitomics科学家通过对1410种兔杂交瘤单克隆抗体亲和力检测分析兔单抗亲和力接近pM级别（Landry JP, et al. J Immunol Methods. 2015）；

特异性：另外针对差异较小的突变分子具有很高的特异性识别能力；

多样性：兔源抗体有更广的识别表位，多样性高更易于做差异化的抗体开发；

泛修饰：适合特异性检测糖基化、乙酰化、甲基化、泛素化等氨基酸修饰位点；

多应用：对于多种应用的兼容性也较高，单克隆能同时满足多种应用；

鼠模型：规避了动物模型上对小鼠的选择导致使用鼠源一抗后抗鼠二抗的交叉反应问题；

易改造：通过分析谱系相关组中的保守序列代表对IgG的结构和功能至关重要的残基，兔IgG更简单的结构适合CDR移植工程化改造。