抗体开发之抗原选择

在生命科学领域中，不管是生物医药还是基础科研，研究人员长期以来使用抗体追踪感兴趣的蛋白质，因为它们能与特定靶标结合。

（Bradbury A, et al. Nature. 2015）

好的抗体是如何生产制备的呢？如果把抗体开发与重组蛋白表达类比：抗原便相当于表达载体，免疫动物就是表达宿主，而开发平台便是生产抗体的一个工具，通过对它们进行整合，开发生产出识别特定靶点、满足特定应用场景的抗体。

之前我们讨论了免疫动物对抗体开发的影响（抗体开发之物种选择）抗体开发平台的差异（抗体开发之平台选择），而作为抗体开发的第一步-免疫原准备，虽然尤为重要但总是让人忽略，很多时候在早期抗原设计上就已经决定了抗体开发的最终成败。而在抗原准备上需要回答以下问题：

1. 抗原类型选择
2. 抗原制备方式

抗原类型选择

抗原类型大致可以分为：细胞、多肽、蛋白、基因。兼顾开发成本和难度上进行决定：
细胞：靶点不明确，或蛋白重组表达难度大，需先筛选过表达细胞系。
多肽：在兼顾免疫原性的同时结合内源线性表位结构，保障WB线性表位验证的同时可以兼顾CHIP、IF或者其他复杂应用。

蛋白：免疫原位点多，成功几率高。针对结构复杂蛋白，常常采用重组表达后进行免疫原制备，尽可能地保障后续能够识别天然结构的IF、FC等应用场景；
基因：免疫技术难度和失败风险较高，一般搭配其他免疫类型共免疫。

抗原制备方式

对于细胞、多肽、基因免疫原，抛开方案设计，在制备中都是比较单一，而重组蛋白在制备中兼顾的因素会更多一些，涉及到了重组表达区段，表达载体，表达宿主等选择，这需要更为综合的评估。

重组表达区段：结合后期抗体应用，以及内源蛋白自身特性、结构等因素决定目的表达片段的取舍。

 

表达宿主：制备抗体的应用要求越高，对于免疫原蛋白制备要求越需要近似于内源蛋白的结构和修饰，这样才能保证外源重组蛋白免疫原造成的偏差越小。一般在原核大肠杆菌和真核哺乳细胞表达宿主之间进行取舍。
表达载体：在确定表达宿主基础上，基于标签、信号肽、启动子等多方考量设计。

汇总

综合考虑多数采用多肽和重组蛋白作为抗原类型，在选择重组蛋白免疫原基础上，满足常规抗体应用需求（WB、CHIP、IF等）情况下可选择原核大肠杆菌进行制备重组蛋白，后续开发常为多克隆抗体。对于高质量单克隆抗体的制备上，尽量选择真核哺乳表达的重组蛋白抗原。