PCR技术

一、PCR技术定义
PCR技术，即聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年（1993年获诺贝尔化学奖）建立的。PCR技术，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。它可以在试管中建立反应，经数小时之后，就能将极微量的目的基因或某一特定DNA片段扩增数十万乃至千百万倍。
二、PCR技术原理
该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依靠于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端，并以此为起始点，沿模板5´→3´方向延伸，合成一条新的DNA互补链。
三、PCR反应体系
(1)缓冲溶液：提供一个稳定的pH和适当的Mg2+离子浓度；
(2)作为模板的DNA序列（即要扩增的目的DNA） ；
(3)四种dNTPs；
(4)引物：与被分离的目的基因两条链的顶端序列互补的DNA引物（通常20~30nt)；
(5)热稳定的DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）。
四、实验室常用体系
（1）以ABM为例：
F(10uM）：1ul
R(10uM）：1ul
2MIX ：25ul
模板(100ng/ul) ：1ul
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